[發明專利]一種刺桐堿的制備方法有效
| 申請號： | 202110606538.7 | 申請日： | 2021-05-31 |
| 公開（公告）號： | CN113336690B | 公開（公告）日： | 2022-05-03 |
| 發明（設計）人： | 李冬利;黃毅祺;翟擎峰;冼燕英;莫金鳳;鄒子銘;謝寅正;吳盼盼;洪為謙;甘禮社;張焜 | 申請（專利權）人： | 五邑大學;江門市大健康國際創新研究院 |
| 主分類號： | C07D209/20 | 分類號： | C07D209/20 |
| 代理公司： | 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205 | 代理人： | 梁國平 |
| 地址： | 529000 廣*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 刺桐 制備 方法 | ||
1.一種刺桐堿的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：
S1、提?。?/p>
取牛大力藥材烘干，粉碎，過100目篩，烘干，取680 g細粉，配置好體積濃度為70%乙醇水溶液，按照料液比1：15 g/mL，在80℃下回流提取兩次；
旋蒸回收乙醇，得到粗提取物100 g，按照高效液相色譜法測定粗提物中刺桐堿的含量為1.50%；
其中，所述牛大力藥材購自廣東麥林科生物科技有限公司電白基地；
S2、萃取：
在步驟S1制得的粗提取物加適量蒸餾水溶解，得懸濁液；
按懸濁液與萃取劑為1：1的體積比進行萃??；萃取分兩段進行，先用乙酸乙酯萃取，再用正丁醇萃取，重復萃取5次；
萃取完畢后，合并正丁醇層和水層；將正丁醇層旋蒸致無液體蒸出，得萃取物27 g；
按照高效液相色譜法測定萃取物中刺桐堿的含量為3.49%；
萃取剩余水相里只檢測到微量刺桐堿，可見刺桐堿富集在正丁醇層；
其中，所述粗提取物與蒸餾水的料液比為1:1；
S3、大孔樹脂分離：
用蒸餾水超聲溶解步驟S2制得的萃取物27 g；蒸餾水與萃取物的料液比為1:2，過預處理后的D101大孔樹脂柱，分別用2BV蒸餾水、4BV 體積濃度為10%乙醇、3BV 體積濃度為30%乙醇洗脫，收集洗脫液，控制滴速為1.5BV/h；將洗脫液收集合并蒸干溶劑得純化提取物I2.3 g；
按照高效液相色譜法測定純化提取物I中刺桐堿的含量為39.11%；
S4、凝膠柱分離：
將步驟S3制得的純化提取物I用甲醇水溶液溶解；其中，純化提取物I與甲醇水溶液料液比為1:1，甲醇水溶液中甲醇和水的體積比為1:1；
過Sephadex LH-20 葡聚糖凝膠柱，以二氯甲烷和甲醇混合溶液為洗脫劑，收集洗脫液；其中，洗脫劑中二氯甲烷和甲醇的體積比為1:1；
通過TLC檢測，與標準品對照，再蒸干洗脫液中溶劑得純化提取物Ⅱ1428.8 mg；
所述標準品為購自上海源葉生物科技有限公司的刺桐堿標準品；
所述刺桐堿標準品的質量純度為98%；
按照高效液相色譜法測定純化提取物Ⅱ中刺桐堿的含量為53.46%；
S5、重結晶：
在步驟S4制得的純化提取物Ⅱ里加入甲醇水溶液，溶解后放置通風櫥里結晶，固液分離收集晶體；其中，純化提取物Ⅱ和甲醇水溶液的料液比為1:1，甲醇水溶液中甲醇和水體積比為1:1；
然后用甲醇洗脫晶體，得到結晶提取物Ⅲ539.9 mg和洗液蒸干物826.3 mg，分別用高效液相色譜法測定結晶提取物Ⅲ中刺桐堿含量為99.11%和洗液蒸干物中刺桐堿含量為48.43%；
采用HPLC峰面積歸一化法檢測結晶提取物純度為99.20%。
2.一種刺桐堿的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：
S1、提取：
取牛大力藥材烘干、粉碎，稱重得1600 g，配置好體積濃度為70%乙醇水溶液，按照料液比1：15 g/mL，室溫下浸泡提取3天，每天攪拌兩次，共提取3次；
浸泡液合并后旋蒸干回收乙醇得到粗提取物230g；按照高效液相色譜法測定粗提物中刺桐堿的含量為0.41%；
其中，所述牛大力藥材購自廣東麥林科生物科技有限公司的封開基地；
S2、萃?。?/p>
取230 g步驟S1制得的粗提取物，加適量蒸餾水溶解，得懸濁液；
其中，粗提取物和蒸餾水的料液比為1:1；
按懸濁液和萃取劑的體積比為1：1進行萃取，萃取分兩段進行；依次用石油醚和正丁醇萃取，重復萃取5次；
萃取完畢，合并正丁醇層，旋蒸致無液體蒸出，得萃取物62 g；
按照高效液相色譜法測定萃取物中刺桐堿的含量為1.77%；
S3、大孔樹脂分離：
取步驟S2制得的提取物62 g用蒸餾水超聲溶解，過預處理后的D101大孔樹脂柱，分別用2BV蒸餾水、3BV 體積濃度為10%乙醇、3BV 體積濃度為30%乙醇洗脫，收集洗脫液；將洗脫液收集合并蒸干溶劑得純化提取物I 2.6 g；
其中提取物與蒸餾水的料液比為1:2；
按照高效液相色譜法測定純化提取物I中刺桐堿的含量為56.03%；
S4、凝膠柱分離：
將純化提取物I用甲醇水溶液溶解，過MCI小孔樹脂凝膠柱，其中，純化提取物I與甲醇水溶液料液比為1:1，甲醇水溶液中甲醇和水的體積比為1:1；
以二氯甲烷和甲醇混合溶液為洗脫劑，收集洗脫液；二氯甲烷和甲醇混合溶液中二氯甲烷和甲醇體積比為1:1；
通過TLC檢測，與標準品對照，再蒸干洗脫液中溶劑得純化提取物Ⅱ1715.8 mg；
所述標準品為購自上海源葉生物科技有限公司的刺桐堿標準品；
所述刺桐堿標準品的質量純度為98%；
按照高效液相色譜法測定純化提取物Ⅱ中刺桐堿的含量為67.59%；
S5、重結晶：
在純化提取物Ⅱ里加入甲醇水溶液，溶解后放置通風櫥里結晶，固液分離收集晶體；其中，純化提取物Ⅱ和甲醇水溶液的料液比為1:1，甲醇水溶液中甲醇和水體積比為1:1；
然后用甲醇洗脫晶體，得到結晶提取物Ⅲ874.1mg，按照高效液相色譜法測定結晶提取物Ⅲ中刺桐堿含量為99.12%；
采用HPLC峰面積歸一化法檢測結晶提取物純度為99.36%。
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