[發明專利]一種利用膜莢黃芪種子提取膜莢黃芪凝集素蛋白的方法

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• 申請號: 202110605820.3
• 申請日: 2021-06-01
• 公開（公告）號: CN113185591A
• 公開（公告）日: 2021-07-30
• 發明（設計）人: 張曉秋
• 申請（專利權）人: 江蘇樸荷生物科技有限公司
• 主分類號: C07K14/42
• 分類號: C07K14/42;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/16
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本發明提供一種利用膜莢黃芪種子提取膜莢黃芪凝集素蛋白的方法，涉及屬于生物技術領域。該一種利用膜莢黃芪種子提取膜莢黃芪凝集素蛋白的方法，以膜莢黃芪種子為原料，包括以下步驟：S1、預處理：先將原料用25?35℃的清水進行沖洗，然后將種子去殼、碾碎，浸泡在40?55攝氏度的溫水中1.5?3天，然后將其攪拌成漿液；S2、提取：通過40um微孔濾膜進行過濾水分，然后向漿液中加入漿液體積2％?5％瓊脂粉、并與漿液攪拌均勻，然后置于離心機中進行離心，收集上清液，再放進透析袋中進行透析，多次透析后得到初產品。通過在提取前進行預處理，制成充分均勻的漿液，然后進行提取和純化，還加入瓊脂粉，會使部分蛋白與其結合，保留住大部分的凝集素蛋白。

技術領域

本發明涉及屬于生物技術領域，具體為一種利用膜莢黃芪種子提取膜莢黃芪凝集素蛋白的方法。

背景技術

膜莢黃芪是一種中藥，具有補氣升陽，益衛固表，利水消腫，托瘡生肌等作用，藥用價值極高，在我國有大面積的種植和培養。凝集素具有多種生物學功能，其潛在的研究價值逐漸被挖掘。凝集素是一類非免疫性的蛋白或糖蛋白，能可逆地、特異地與碳水化合物相互作用，具有多變的氨基酸序列，廣泛的分布于微生物、病毒及植物中。凝集素有多種功能、結構、組織定位及糖結合特異性。

目前利用膜莢黃芪種子提取膜莢黃芪凝集素蛋白的方法提取出來的凝集素蛋白的提取率比較低，較多的蛋白質被損失掉，造成很大的浪費。

發明內容

(一)解決的技術問題

針對現有技術的不足，本發明提供了一種利用膜莢黃芪種子提取膜莢黃芪凝集素蛋白的方法，解決了現有的提取方法膜莢黃芪種子的提取率低的問題。

(二)技術方案

為實現以上目的，本發明通過以下技術方案予以實現：一種利用膜莢黃芪種子提取膜莢黃芪凝集素蛋白的方法，以膜莢黃芪種子為原料，包括以下步驟：

S1、預處理：

先將原料用25-35℃的清水進行沖洗，沖洗時間為12-25分鐘，然后將種子去殼、碾碎，浸泡在40-55攝氏度的溫水中1.5-3天，然后將其攪拌成漿液；

S2、提取：

通過40um微孔濾膜進行過濾水分，然后向漿液中加入漿液體積2％-5％瓊脂粉、并與漿液攪拌均勻，然后置于離心機中進行，18000r/min、離心20min，收集上清液，再加入20mmol/L、pH7.0的PBS緩沖液30ml進行溶解，放進透析袋中進行透析，多次透析后得到初產品；

S3、純化：

將得到的初產品分離純化，用18mmol/l、pH7.0Tris-HCl緩沖液洗脫，調節流速在0.8ml/min，收集各個洗脫峰；經SUPERDEX-G25分子篩層析后，得到一個主要的蛋白峰，即為膜莢黃芪凝集素蛋白AML；

S4、檢測：

對純化后的產品進行蛋白質含量檢測為75％-83％。

優選的，所述S1中浸泡時溫水與原料的體積比為1.2-1.5：1，所述浸泡過程中對水溫進行恒溫加熱。

優選的，所述S1中的攪拌包括機械攪拌和超聲波攪拌，先進行機械攪拌10-15min，然后進行超聲波攪拌10-25min，使其完全成為漿液。

優選的，所述對初產品進行蛋白質含量檢測為45％-62％。

優選的，所述預處理、提取、純化得到的產品均在-15℃至-18℃的冷凍箱內部保存。

優選的，所述S1中浸泡時加入溫水體積1％-5％的精鹽。

優選的，所述對純化后的產品進行含糖量檢測為16％-25％。