[發(fā)明專利]一種利用膜莢黃芪種子提取膜莢黃芪凝集素蛋白的方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202110605820.3 | 申請日： | 2021-06-01 |
| 公開（公告）號： | CN113185591A | 公開（公告）日： | 2021-07-30 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 張曉秋 | 申請（專利權(quán)）人： | 江蘇樸荷生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C07K14/42 | 分類號： | C07K14/42;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/16 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 214106 江蘇省無*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 利用 黃芪 種子 提取 凝集素 蛋白 方法 | ||
1.一種利用膜莢黃芪種子提取膜莢黃芪凝集素蛋白的方法，以膜莢黃芪種子為原料，其特征在于，包括以下步驟：
S1、預(yù)處理：
先將原料用25-35℃的清水進(jìn)行沖洗，沖洗時(shí)間為12-25分鐘，然后將種子去殼、碾碎，浸泡在40-55攝氏度的溫水中1.5-3天，然后將其攪拌成漿液；
S2、提取：
通過40um微孔濾膜進(jìn)行過濾水分，然后向漿液中加入漿液體積2％-5％瓊脂粉、并與漿液攪拌均勻，然后置于離心機(jī)中進(jìn)行，18000r/min、離心20min，收集上清液，再加入20mmol/L、pH7.0的PBS緩沖液30ml進(jìn)行溶解，放進(jìn)透析袋中進(jìn)行透析，多次透析后得到初產(chǎn)品；
S3、純化：
將得到的初產(chǎn)品分離純化，用18mmol/l、pH7.0Tris-HCl緩沖液洗脫，調(diào)節(jié)流速在0.8ml/min，收集各個(gè)洗脫峰；經(jīng)SUPERDEX-G25分子篩層析后，得到一個(gè)主要的蛋白峰，即為膜莢黃芪凝集素蛋白AML；
S4、檢測：
對純化后的產(chǎn)品進(jìn)行蛋白質(zhì)含量檢測為75％-83％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用膜莢黃芪種子提取膜莢黃芪凝集素蛋白的方法，其特征在于：所述S1中浸泡時(shí)溫水與原料的體積比為1.2-1.5：1，所述浸泡過程中對水溫進(jìn)行恒溫加熱。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用膜莢黃芪種子提取膜莢黃芪凝集素蛋白的方法，其特征在于：所述S1中的攪拌包括機(jī)械攪拌和超聲波攪拌，先進(jìn)行機(jī)械攪拌10-15min，然后進(jìn)行超聲波攪拌10-25min，使其完全成為漿液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用膜莢黃芪種子提取膜莢黃芪凝集素蛋白的方法，其特征在于：所述對初產(chǎn)品進(jìn)行蛋白質(zhì)含量檢測為45％-62％。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用膜莢黃芪種子提取膜莢黃芪凝集素蛋白的方法，其特征在于：所述預(yù)處理、提取、純化得到的產(chǎn)品均在-15℃至-18℃的冷凍箱內(nèi)部保存。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用膜莢黃芪種子提取膜莢黃芪凝集素蛋白的方法，其特征在于：所述S1中浸泡時(shí)加入溫水體積1％-5％的精鹽。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用膜莢黃芪種子提取膜莢黃芪凝集素蛋白的方法，其特征在于：所述對純化后的產(chǎn)品進(jìn)行含糖量檢測為16％-25％。
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