[發明專利]一種基于金團簇和TMB比色熒光雙信號檢測抗壞血酸的方法

在審

• 申請號: 202110605028.8
• 申請日: 2021-05-31
• 公開（公告）號: CN113324962A
• 公開（公告）日: 2021-08-31
• 發明（設計）人: 霍峰;蔣志;丁豪;王顯祥
• 申請（專利權）人: 四川中科微納科技有限公司;四川農業大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;G01N21/33;G01N21/78;G01N15/14;G01N15/00
• 代理公司: 成都正華專利代理事務所(普通合伙) 51229
• 代理人: 李蕊

本發明公開了一種基于熒光及比色雙信號檢測抗壞血酸的方法，屬于熒光分析檢測技術領域。現有大多采用單一熒光或比色檢測壞血酸，存在著背景信號干擾大、環境波動大的問題。本發明檢測方法先將TMB溶液和納米MnO₂混合后進行氧化孵育，孵育完成后過濾去除納米MnO₂，得到藍色oxTMB溶液，將oxTMB溶液、AuNCs溶液、含AA待測溶液混合反應，基于熒光內濾效應，通過測定相對熒光強度和紫外吸收強度檢測AA。本發明不需要昂貴的儀器和專業培訓的人員來進行操作即可檢測，同時具有省時省力，具有檢測限低，準確性好，簡單快速檢測的優點。

技術領域

本發明屬于熒光分析檢測技術領域，具體涉及一種基于金團簇和TMB比色熒光雙信號檢測抗壞血酸的方法

背景技術

抗壞血酸，又稱為維生素C，在維持人體的正常代謝中起著非常重要的作用它有很強的還原能力，是人體中一種重要且高效的抗氧化劑。此外，抗壞血酸在促進人膠原蛋白和神經遞質的合成、促進抗體的形成和鐵離子的吸收等過程中具有不可替代的作用。抗壞血酸還具有清除自由基和預防各種疾病的能力。當人體嚴重缺乏抗壞血酸時，就會引起壞血病。由于人類無法自主合成抗壞血酸，抗壞血酸主要從食品或保健藥物中獲得。因此，它已成為一種常見的添加劑，并廣泛應用于食品、醫藥、化妝品等領域。由于抗壞血酸在日常生活中的臨床和生物學意義，有必要開發一種快速、靈敏的抗壞血酸檢測方法，用于化學分析和臨床疾病診斷。

到目前為止，已經建立了大量檢測抗壞血酸的方法，包括熒光法、比色法和電化學方法。在這些方法中，熒光法和比色法因其工藝簡單、操作簡單、成本低、設備相對簡單等優點而受到廣泛關注。但在這些方法中，大多采用單一熒光或比色檢測手段，存在著背景信號干擾大、環境波動大的問題。因此，多信號傳感系統近年來受到了廣泛的關注。

發明內容

本發明解決的技術問題是現有單一的熒光或比色檢測抗壞血酸，背景信號干擾大、環境波動大。

本發明為解決上述技術問題，采用的技術方案是提供一種基于金團簇和TMB比色熒光雙信號檢測抗壞血酸的方法，將TMB溶液和納米MnO₂混合后進行氧化孵育，孵育完成后過濾去除納米MnO₂，得到藍色oxTMB溶液，將oxTMB溶液、AuNCs、AA混合反應，基于熒光內濾效應，通過測定相對熒光強度和紫外吸收強度檢測AA含量。

其中，AuNCs具有熒光，且其熒光發射光譜與oxTMB的特征吸收光譜有重疊部分。

其中，AuNCs熒光光譜的最大激發波長和最大發射波長分別為410nm和572nm。

其中，AuNCs是以HAuCl₄·4H₂O為原料、谷胱甘肽為穩定劑制得。

具體的，氧化孵育具體為將3ml TMB溶液(2mM)和600μL MnO2納米片(4mg/mL)懸液依次加入80mL pH為4的HAc-NaAc(0.2mM)緩沖溶液中，攪拌并在室溫下孵育1小時后，將混合物過濾去除MnO₂納米片。

具體的，將200μL AuNCs(200μM)、1mL oxTMB(72μM，由TMB轉化而來)和AA溶液混合在一起室溫反應。

本發明檢測方法具體可按如下步驟進行：

(1)配制濃度梯度為0-200μM的抗壞血酸標準溶液；

(2)將200μL AuNCs(200μM)、1mL oxTMB(72μM，由TMB轉化而來)和上述不同濃度的AA標準溶液混合在一起室溫反應，分別記錄不同AA濃度下溶液在572nm和652nm處的熒光發射峰和紫外吸收峰，將兩種峰值變化與對應的抗壞血酸濃度進行線性擬合得到線性方程，建立熒光檢測抗壞血酸標準曲線和比色檢測抗壞血酸標準曲線；