[發明專利]一種基于金團簇和TMB比色熒光雙信號檢測抗壞血酸的方法

在審

• 申請號: 202110605028.8
• 申請日: 2021-05-31
• 公開（公告）號: CN113324962A
• 公開（公告）日: 2021-08-31
• 發明（設計）人: 霍峰;蔣志;丁豪;王顯祥
• 申請（專利權）人: 四川中科微納科技有限公司;四川農業大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;G01N21/33;G01N21/78;G01N15/14;G01N15/00
• 代理公司: 成都正華專利代理事務所(普通合伙) 51229
• 代理人: 李蕊

1.一種基于金團簇和TMB比色熒光雙信號檢測抗壞血酸的方法，其特征在于：將TMB溶液和納米MnO₂混合后進行氧化孵育，孵育完成后過濾去除納米MnO₂，得到藍色oxTMB溶液，將oxTMB溶液、AuNCs溶液、含AA待測溶液混合反應，基于熒光內濾效應，通過測定溶液相對熒光強度和紫外吸收強度檢測AA含量。

2.根據權利要求1所述的基于金團簇和TMB比色熒光雙信號檢測抗壞血酸的方法，其特征在于：所述AuNCs具有熒光，且其熒光發射光譜與oxTMB的特征吸收光譜有重疊部分。

3.根據權利要求1所述的基于金團簇和TMB比色熒光雙信號檢測抗壞血酸的方法，其特征在于：所述AuNCs熒光光譜的最大激發波長和最大發射波長分別為410nm和572nm。

4.根據權利要求1所述的基于金團簇和TMB比色熒光雙信號檢測抗壞血酸的方法，其特征在于：所述AuNCs是以HAuCl₄·4H₂O為原料、谷胱甘肽為穩定劑制得。

5.根據權利要求1所述的基于金團簇和TMB比色熒光雙信號檢測抗壞血酸的方法，其特征在于：所述氧化孵育具體為將3ml TMB溶液(2mM)和600μL MnO₂納米片(4mg/mL)懸液依次加入80mL pH為4的HAc-NaAc(0.2mM)緩沖溶液中，攪拌并在室溫下孵育1小時后，將混合物過濾去除MnO₂納米片。

6.根據權利要求1所述的基于金團簇和TMB比色熒光雙信號檢測抗壞血酸的方法，其特征在于：將200μL AuNCs(200μM)、1mL oxTMB(72μM，由TMB轉化而來)和AA溶液混合在一起室溫反應。

7.根據權利要求1所述的基于金團簇和TMB比色熒光雙信號檢測抗壞血酸的方法，其特征在于具體包括如下步驟：

(1)配制不同濃度梯度的抗壞血酸標準溶液；

(2)將AuNCs、oxTMB和不同濃度的AA標準溶液混合在一起室溫反應，分別記錄溶液在572nm和652nm處的熒光發射峰和紫外吸收峰，將兩種峰值變化與對應的抗壞血酸濃度進行線性擬合得到線性方程，建立抗壞血酸標準曲線；

(3)將oxTMB溶液、AuNCs溶液、含AA待測溶液混合反應，通過測定溶液相對熒光強度和紫外吸收強度檢測AA含量。

8.根據權利要求7所述的基于金團簇和TMB比色熒光雙信號檢測抗壞血酸的方法，其特征在于：所述抗壞血酸標準溶液不同濃度梯度為0-200μM。

9.根據權利要求1所述的基于金團簇和TMB比色熒光雙信號檢測抗壞血酸的方法在檢測飲料中抗壞血酸的應用，其特征在于：對飲料樣品過濾并合理稀釋，將200μL AuNCs(200μM)、1mL oxTMB(72μM)和200μL的樣品溶液依次加入到2ml的PE離心管中，充分混合，室溫孵育10分鐘后，立即檢測混合溶液的紫外吸收和熒光光譜，與抗壞血酸標準曲線比對后得到飲料中抗壞血酸含量。

10.根據權利要求1所述的基于金團簇和TMB比色熒光雙信號檢測抗壞血酸的方法在檢測活細胞中抗壞血酸的應用，其特征在于：結合流式細胞術或熒光顯微鏡成像檢測細胞內AA。