[發(fā)明專利]一種羧基二羥鬼筆毒肽時間分辨熒光免疫檢測卡、制備及檢測方法與應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110604107.7
• 申請日: 2021-05-31
• 公開（公告）號: CN113406333A
• 公開（公告）日: 2021-09-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 沈建忠;于雪芝;王戰(zhàn)輝;江海洋;溫凱;朱建宇;余文博;史為民
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/58;G01N33/558;G01N33/543;G01N21/64
• 代理公司: 北京路浩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 孫怡

本發(fā)明涉及多肽檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體公開了一種羧基二羥鬼筆毒肽時間分辨熒光免疫檢測卡、制備及檢測方法與應(yīng)用。本發(fā)明的羧基二羥鬼筆毒肽時間分辨熒光免疫檢測卡，其包括底板和放置在所述底板上的樣品墊、含有銪微球標(biāo)記的抗羧基二羥鬼筆毒肽抗體的釋放墊、含有羧基二羥鬼筆毒肽檢測線T以及質(zhì)控線C的硝酸纖維素膜和吸水墊。本發(fā)明采用時間分辨熒光免疫分析技術(shù)建立了一種檢測待測樣本中羧基二羥鬼筆毒肽含量的快速檢測方法，該方法的檢測靈敏度高，定量限0.1μg/L，達(dá)到了儀器方法的靈敏度水平。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及多肽檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，涉及一種羧基二羥鬼筆毒肽時間分辨熒光免疫檢測卡、制備及檢測方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)

毒蘑菇中毒是食物中毒事件中導(dǎo)致死亡的主要原因之一。90％以上的蘑菇中毒死亡是由含鵝膏肽類毒素的蘑菇引起，鬼筆毒肽類是鵝膏肽類毒素的一種，為雙環(huán)七肽，已發(fā)現(xiàn)的有7種，結(jié)構(gòu)相似。羧基二羥鬼筆毒肽(Phallacidin,PCD)為其中一種，并占主要成分，與鵝膏毒肽一起存在，對小鼠的致死劑量是50μg，對人體也有很強(qiáng)的毒性，中毒后使動物或人的肝臟受損，可引起流涎、嘔吐、便血、發(fā)紺、痙攣、肌肉攣縮，以致死亡。它同細(xì)胞松弛素的作用相反，只與聚合的微絲結(jié)合，而不與肌動蛋白單體分子結(jié)合。它同聚合的微絲結(jié)合后，抑制了微絲的解體，因而破壞了微絲的聚合和解聚的動態(tài)平衡。

目前，尿液中羧基二羥鬼筆毒肽殘留含量的主要檢測方法為色譜方法，如氣相色譜法(GC)和高效液相色譜法(HPLC)等。色譜方法一般需要昂貴的檢測儀器，且存在前處理復(fù)雜，操作繁瑣，檢測時間長，檢測成本高的問題，所以色譜方法也不適用于基層實驗室大批量樣本的檢測。

時間分辨熒光免疫分析技術(shù)(Time-resolved fluoroimmunoassay，TRFIA)是以鑭系元素(包括Eu、Tb、Sm、Dy等)作為標(biāo)記物，綜合免疫反應(yīng)的高特異性和鑭系元素標(biāo)記的高靈敏性相結(jié)合而建立的一種新型非放射性免疫檢測技術(shù)。鑭系元素具有Stokes位移大(200nm)和熒光壽命長(1-2ms)的優(yōu)點，可以在最大程度上避免和激發(fā)光和背景熒光信號的干擾，極大地提高了檢測靈敏度。鑒于其上述特點，TRFIA已廣泛應(yīng)用于臨床診斷，以及食品安全檢測等多個領(lǐng)域。但目前尚未應(yīng)用到羧基二羥鬼筆毒肽的檢測中。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種可快速、靈敏檢測羧基二羥鬼筆毒肽的檢測卡、方法及應(yīng)用。

為了實現(xiàn)該目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

一種羧基二羥鬼筆毒肽時間分辨熒光免疫檢測卡，其包括底板和放置在所述底板上的樣品墊、含有銪微球標(biāo)記的抗羧基二羥鬼筆毒肽抗體的釋放墊、含有羧基二羥鬼筆毒肽檢測線T以及質(zhì)控線C(控制線)的硝酸纖維素膜和吸水墊。

本發(fā)明中，所述抗羧基二羥鬼筆毒肽抗體為抗羧基二羥鬼筆毒肽單克隆抗體。

本發(fā)明中，所述含有銪微球標(biāo)記的抗羧基二羥鬼筆毒肽抗體的釋放墊為將銪微球標(biāo)記的抗羧基二羥鬼筆毒肽抗體溶液噴于釋放墊上形成的；

所述銪微球標(biāo)記的抗羧基二羥鬼筆毒肽抗體溶液的濃度為0.1mg/mL。

本發(fā)明中，所述銪微球標(biāo)記的抗羧基二羥鬼筆毒肽抗體溶液中，所述抗羧基二羥鬼筆毒肽抗體和銪微球的質(zhì)量比為1：25；

和/或，所述銪微球為200nm羧基化銪微球。

本發(fā)明中，所述羧基二羥鬼筆毒肽檢測線T由羧基二羥鬼筆毒肽抗原或其溶液形成；

和/或，所述質(zhì)控線C由IgG抗體或IgG抗體溶液形成；

和/或，所述含有羧基二羥鬼筆毒肽檢測線T以及質(zhì)控線C的硝酸纖維素膜為將羧基二羥鬼筆毒肽抗原溶液包被在硝酸纖維素膜形成檢測線T，且將IgG抗體溶液包被在硝酸纖維素膜形成質(zhì)控線C，得到含有羧基二羥鬼筆毒肽檢測線T以及質(zhì)控線C的硝酸纖維素膜；