[發(fā)明專利]一種羧基二羥鬼筆毒肽時間分辨熒光免疫檢測卡、制備及檢測方法與應用

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• 申請日: 2021-05-31
• 公開（公告）號: CN113406333A
• 公開（公告）日: 2021-09-17
• 發(fā)明（設計）人: 沈建忠;于雪芝;王戰(zhàn)輝;江海洋;溫凱;朱建宇;余文博;史為民
• 申請（專利權）人: 中國農(nóng)業(yè)大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/58;G01N33/558;G01N33/543;G01N21/64
• 代理公司: 北京路浩知識產(chǎn)權代理有限公司 11002
• 代理人: 孫怡

1.一種羧基二羥鬼筆毒肽時間分辨熒光免疫檢測卡，其特征在于，包括底板和放置在所述底板上的樣品墊、含有銪微球標記的抗羧基二羥鬼筆毒肽抗體的釋放墊、含有羧基二羥鬼筆毒肽檢測線T以及質(zhì)控線C的硝酸纖維素膜和吸水墊。

2.根據(jù)權利要求1所述的檢測卡，其特征在于：所述抗羧基二羥鬼筆毒肽抗體為抗羧基二羥鬼筆毒肽單克隆抗體。

3.根據(jù)權利要求2所述的檢測卡，其特征在于：

所述含有銪微球標記的抗羧基二羥鬼筆毒肽抗體的釋放墊為將銪微球標記的抗羧基二羥鬼筆毒肽抗體溶液噴于釋放墊上形成的；

所述銪微球標記的抗羧基二羥鬼筆毒肽抗體溶液的濃度為0.1mg/mL。

4.根據(jù)權利要求3所述的檢測卡，其特征在于：

所述銪微球標記的抗羧基二羥鬼筆毒肽抗體溶液中，所述抗羧基二羥鬼筆毒肽抗體和銪微球的質(zhì)量比為1：25；

和/或，所述銪微球為200nm羧基化銪微球。

5.根據(jù)權利要求1-4中任一項所述的檢測卡，其特征在于：

所述羧基二羥鬼筆毒肽檢測線T由羧基二羥鬼筆毒肽抗原或其溶液形成；

和/或，所述質(zhì)控線C由IgG抗體或IgG抗體溶液形成；

和/或，所述含有羧基二羥鬼筆毒肽檢測線T以及質(zhì)控線C的硝酸纖維素膜為將羧基二羥鬼筆毒肽抗原溶液包被在硝酸纖維素膜形成檢測線T，且將IgG抗體溶液包被在硝酸纖維素膜形成質(zhì)控線C，得到含有羧基二羥鬼筆毒肽檢測線T以及質(zhì)控線C的硝酸纖維素膜；

優(yōu)選，所述羧基二羥鬼筆毒肽抗原溶液的包被濃度為0.4mg/mL；

和/或，所述IgG抗體溶液的包被濃度為1.0mg/mL。

6.一種制備權利要求1-5中任一項所述的檢測卡的方法，其特征在于：包括如下步驟：先制備含有銪微球標記的抗羧基二羥鬼筆毒肽抗體的釋放墊和含有羧基二羥鬼筆毒肽檢測線T以及質(zhì)控線C的硝酸纖維素膜；再將樣品墊、所述含有銪微球標記的抗羧基二羥鬼筆毒肽抗體的釋放墊、所述含有羧基二羥鬼筆毒肽檢測線T以及質(zhì)控線C的硝酸纖維素膜和吸水墊組裝到底板上，得到檢測卡。

7.權利要求1-5中任一項所述檢測卡在以下方面的應用：

(1)在制備定量或定性檢測或輔助檢測羧基二羥鬼筆毒肽產(chǎn)品中的應用；

(2)在定量或定性檢測或輔助檢測羧基二羥鬼筆毒肽中的應用。

8.一種檢測或輔助檢測待測樣品中是否含有羧基二羥鬼筆毒肽的方法，其特征在于：包括如下步驟：將待測樣品加入權利要求1-5中任一項所述的檢測卡的樣品墊上，反應，再用熒光免疫定量分析儀檢測反應的產(chǎn)物；

若所述檢測卡的檢測線T熒光信號值小于等于質(zhì)控線C熒光信號值，則待測樣本中含有或候選含有羧基二羥鬼筆毒肽；

若所述檢測卡的檢測線T熒光信號值大于質(zhì)控線C熒光信號值，則待測樣本中不含有或候選不含有羧基二羥鬼筆毒肽。

9.一種檢測或輔助檢測待測樣品中羧基二羥鬼筆毒肽含量的方法，其特征在于：包括如下步驟：

(1)制備標準曲線：取與待測樣品同樣來源且羧基二羥鬼筆毒肽含量小于0.1μg/L的樣本；

再向所述樣本中加入不同濃度的羧基二羥鬼筆毒肽，得到不同濃度的標準品溶液；

再將所述不同濃度的標準品溶液加入權利要求1-5中任一項所述的檢測卡的樣品墊上，反應，再用熒光免疫定量分析儀檢測反應的產(chǎn)物，得到不同濃度的標準品溶液的檢測線T熒光信號值與質(zhì)控線C熒光信號值；

以添加的羧基二羥鬼筆毒肽不同濃度為X軸，不同濃度對應的檢測線T熒光信號值與質(zhì)控線C熒光信號值的比值為Y軸，繪制標準曲線；

(2)將所述待測樣本加入權利要求1-5中任一項所述的檢測卡的樣品墊上，反應，再用熒光免疫定量分析儀檢測反應的產(chǎn)物，得到待測樣本的檢測線T熒光信號值與質(zhì)控線C熒光信號值；

將所述待測樣本的檢測線T熒光信號值與質(zhì)控線C熒光信號值代入步驟(1)得到的標準曲線中，得到待測樣本中羧基二羥鬼筆毒肽的含量。

10.根據(jù)權利要求7所述的應用或權利要求8或9所述的方法，其特征在于：所述待測樣本為尿液、血漿或血清樣本。