[發明專利]一種用于胰腺導管腺癌的早篩評估方法

在審

• 申請號: 202110603740.4
• 申請日: 2021-05-31
• 公開（公告）號: CN113373222A
• 公開（公告）日: 2021-09-10
• 發明（設計）人: 施巍煒
• 申請（專利權）人: 蘇州崛起醫療科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/686;C12Q1/6869;G01N33/543;G01N33/574
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種用于胰腺導管腺癌的早篩評估方法，包括以下操作步驟：S1：選取100個早期胰腺導管腺癌（I或II期）人群和900名健康人群為試驗檢測對象，抽取檢測對象的靜脈全血10毫升，采用離心方法，去掉血細胞，得到血清，如果對象離中心實驗室離心處理有4個小時的間隔，可以采用含有乙二胺四乙酸（EDTA）的普通血液收集管收集。本發明所述的一種用于胰腺導管腺癌的早篩評估方法，利用對血液中蛋白加DNA的多維度檢測來判斷胰腺導管腺癌（PDAC）的風險程度，可以應用于健康人群，早于傳統檢測方法平均8個月，更早期發現胰腺導管腺癌（PDAC），也可以用于對治療中的胰腺導管腺癌的病人的動態監控病情發展，帶來更好的使用前景。

技術領域

本發明涉及生物領域，特別涉及一種用于胰腺導管腺癌的早篩評估方法。

背景技術

胰腺導管腺癌的早篩評估方法是一種進行胰腺癌檢查的支撐方法，胰腺癌是一種惡性腫瘤，當現有檢查手段確診胰腺癌時，這種疾病往往已經發展到十分嚴重的階段，這也導致胰腺癌患者的5年存活率僅為3%左右，是五年存活率最低的一種腫瘤類型，而如果早期可以發現，比如一期的胰腺導管腺癌（PDAC）, 其5年存活率可以達到70%，所以，PDAC的早期診斷和早篩對該疾病有重大的臨床意義，隨著科技的不斷發展，人們對于胰腺導管腺癌的早篩評估方法的要求也越來越高。

現有的胰腺導管腺癌的早篩評估方法在使用時存在一定的弊端，早期PDAC的臨床癥狀并不明顯，影像學檢測的靈敏度低，而基于體液（如血液）的檢測沒有可用的生物標記物，另外，胰腺導管腺癌（PDAC）和胰腺炎不好區別，臨床上廣泛使用血清學檢測生物學標記物“癌抗原19-9”（英文：CA19-9）的特異性低（很多疾病都有CA19-9抬高的結果），即便在有癥狀的PDAC病人里，其靈敏性也只有79-81%，目前的診斷技術，均無法達到臨床可以使用的早期診斷和早篩的目的的產品，不利于人們的使用，給人們的使用過程帶來了一定的不利影響，為此，我們提出一種用于胰腺導管腺癌的早篩評估方法。

發明內容

（一）解決的技術問題

針對現有技術的不足，本發明提供了一種用于胰腺導管腺癌的早篩評估方法，可以應用于健康人群，早于傳統檢測方法平均8個月，更早期發現胰腺導管腺癌（PDAC），達到早發現，早治療的目的；也可以用于對治療中的胰腺導管腺癌的病人的動態監控病情發展，可以有效解決背景技術中的問題。

（二）技術方案

為實現上述目的，本發明采取的技術方案為：一種用于胰腺導管腺癌的早篩評估方法，包括以下操作步驟：

S1：選取100個早期胰腺導管腺癌(I或II期)人群和900名健康人群為試驗檢測對象，抽取檢測對象的靜脈全血10毫升，采用離心方法，去掉血細胞，得到血清，如果對象離中心實驗室離心處理有4個小時的間隔，可以采用含有乙二胺四乙酸（EDTA）的普通血液收集管收集，之后通過冰袋運輸即可；

S2：取血清1毫升，平均分為3份，分別對三個蛋白，包括CA19-9、THBS2、MUC5AC，進行用酶聯免疫吸附測定（ELISA）方法檢測，這里所用的抗體為商業化抗體，操作按照標準ELISA的方法進行；

S3：剩余的大約4毫升血清，首先抽提CELL FREE DNA（即CF-DNA）；

S4：CF-DNA產物大約為50納克左右，其中的10納克進行對KRAS基因的下一代測序（NGS）檢測突變檢測，用多重PCR的方法捕獲和富集7種常見的KRAS突變，捕獲和擴增富集后的產物，按照ILLUMINA的測序文庫搭建方法建立文庫，在ILLUMINA測序儀（MYSEQ或NOVASEQ）上進行標準的測序過程；

S5：另外的40納克對兩個甲基化位點進行NGS的甲基化的檢測，首先用亞硫酸氫鹽處理對象DNA,甲基化的胞嘧啶堿基不變，而未發生甲基化的胞嘧啶被轉化為尿嘧啶，隨后按照標準的測序方法進行建庫，測序；

S6：根據機器學習模型的綜合打分，給出胰腺導管腺癌（PDAC）的患病風險得分，該得分的閾值根據數學統計模型得出，在閾值以上的是高危或患病人，建議積極的臨床檢測和隨訪。