[發明專利]長序榆高效再生體系的建立方法

有效

• 申請號: 202110603633.1
• 申請日: 2021-05-31
• 公開（公告）號: CN113287522B
• 公開（公告）日: 2023-04-07
• 發明（設計）人: 洪震;洪琮浩
• 申請（專利權）人: 華東藥用植物園科研管理中心
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01G24/15;A01G17/00
• 代理公司: 杭州浙科專利事務所(普通合伙) 33213
• 代理人: 劉元慧

本發明長序榆高效再生體系的建立方法，按下列步驟進行：1）愈傷組織誘導培養；2）不定芽誘導培養；3）不定芽增殖培養；4）壯苗培養；5）分化苗生根培養；6）再生植株的移栽。本發明通過使用較少的植物激素就可以高效地達到預期繁育長序榆的目的，降低因激素價格高帶來的高成本；牛血清蛋白的加入，一方面可以提供植物新生芽萌發與增殖對營養物質的需求，另一方面還可有效預防組織褐化帶來的組織死亡；兩步馴化法，簡單易行，操作簡便，可以有效提高小苗成活率。

技術領域

本發明屬于植物組織培養技術領域，具體是以長序榆的腋芽為外植體，經過愈傷組織誘導、不定芽誘導、不定芽增殖、壯苗、生根、移栽，實現高效再生，為其遺傳轉化研究奠定基礎。

背景技術

長序榆隸屬于榆科榆屬，是落葉喬木。其樹干通直，材質細膩優良，截面具天然美麗輪紋，是高檔家居板材來源樹種之一。長序榆原產北美，因環境等變化原因，長序榆最后滅絕，而長序榆在我國的發現（是我國特有樹種），不僅豐富了我國榆屬植物資源，而且其對于研究北美和東亞植物區系具有重要的科學意義。在我國，長序榆群落零星分散，自然更新困難，被列為國家2級重點保護樹種。加上人類活動的影響，長序榆原生境被干擾破壞，種群面臨瀕危滅絕的境地。

目前，為了拯救這一瀕危樹種，科技人員主要從長序榆生境的保護及資源調查分布展開了研究。對于繁育而言，榆科植物的繁育手段只見于常見園林觀賞樹種的嫁接（如金葉榆、歐洲白榆、垂榆等）以及個別榆科樹種（如裂葉榆等）的播種繁育，組培技術在長序榆甚至在榆科植物中的研究及應用還鮮有報道。由于樹種的遺傳個體差異，造成植物本身對生長環境的適應及種群延續策略而有所不同。嫁接技術是無性繁殖植物的一種有效方法，但是嫁接繁殖受季節限制，并不能全年生產，并不能滿足市場對大量苗木的需求。種子繁殖雖然可以短時間可以獲取大量苗木，但種子繁育并不能完全保留母本的優良性狀。因此，如何快速高效周年生產大量苗木，且保留母本的優良性狀，是科技工作者不斷研究的課題。因此，細胞工程技術（組織培養技術）在快繁植物方面獲得了廣泛應用。但是，由于物種的本身特性的差異，并不是每一種植物都可以通過組培獲取再生的幼苗。因此，每種植物的組培技術方法需要不斷的優化探索，突破組培中關鍵的如組織褐化、玻璃化及生根率低等瓶頸技術。

對于長序榆而言，一是由于其種群數量及其稀少，且一般生長在深山高海拔、地勢險要的生境，二是長序榆樹干通直，高大，采集大量的嫁接枝條及其困難，三是長序榆果實小而輕，且密被白色長柔毛，極易被風吹散，采種困難。

因此，如何利用現有的有限資源，快速高效繁育長序榆，且保留母本的優良性狀，文獻鮮有報道。因此，本研究對長序榆展開了為期多年的組培繁育研究，獲得了較為成熟的技術方法，為擴大長序榆種群數量，也為進一步展開長序榆研究提供更多的苗木，提供了技術支持。

發明內容

針對現有技術中存在的問題，本發明?利用長序榆的芽為外植體，經過愈傷組織誘導、不定芽誘導、不定芽增殖、壯苗、生根、移栽，建立其再生體系的方法。

所述的長序榆高效再生體系的建立方法，其特征在于按下列步驟進行：

1）愈傷組織誘導培養

從當年生休眠枝條中剪取帶有一個腋芽的莖段，自來水沖洗30min后，75%酒精浸泡2min，再用質量比濃度為0.1%的升汞消毒8min，在超凈工作臺中用無菌水沖洗5次，最后在體式顯微鏡下剝掉葉鞘，切取帶芽莖段0.3-0.5cm，每管一個芽接種于誘導培養基中，誘導基本培養基為MS，添加的外源激素為6-BA即6-芐氨基腺嘌呤、TDZ即噻重氮苯基脲、GA₃即赤霉素，pH為5.9-6.0，培養條件為：培養室溫度設定為23-25℃，光照時間13h，光照強度為35?μmol/?O.s，誘導培養25±2d，愈傷組織形成；

2）不定芽誘導培養