[發明專利]長序榆高效再生體系的建立方法

有效

• 申請號: 202110603633.1
• 申請日: 2021-05-31
• 公開（公告）號: CN113287522B
• 公開（公告）日: 2023-04-07
• 發明（設計）人: 洪震;洪琮浩
• 申請（專利權）人: 華東藥用植物園科研管理中心
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01G24/15;A01G17/00
• 代理公司: 杭州浙科專利事務所(普通合伙) 33213
• 代理人: 劉元慧

1.長序榆高效再生體系的建立方法，其特征在于按下列步驟進行：

1）愈傷組織誘導培養

從當年生休眠枝條中剪取帶有一個腋芽的莖段，自來水沖洗30min后，75%酒精浸泡2min，再用質量比濃度為0.1%的升汞消毒8min，在超凈工作臺中用無菌水沖洗5次，最后在體式顯微鏡下剝掉葉鞘，切取帶芽莖段0.3-0.5cm，每管一個芽接種于誘導培養基中，誘導基本培養基為MS，添加的外源激素為6-BA即6-芐氨基腺嘌呤、TDZ即噻重氮苯基脲、GA₃即赤霉素，pH為5.9-6.0，培養條件為：培養室溫度設定為23-25℃，光照時間13h，光照強度為35μmol/?O.s，誘導培養25±2d，愈傷組織形成；6-BA的濃度為2mg/L、TDZ的濃度為0.1mg/L、GA₃的濃度為0.1mg/L；

2）不定芽誘導培養

把誘導的愈傷組織切成小塊轉接到誘導芽培養基中，進行不定芽誘導，不定芽誘導基本培養基為MS，添加6-BA即6-芐氨基腺嘌呤、IBA即吲哚丁酸、牛血清蛋白，pH為5.9-6.0，培養條件為：培養室溫度設定為23-25℃，光照時間13h，光照強度為50-55mol/?O.s，培養51±2d，簇狀不定芽形成；6-BA的濃度為2mg/L、IBA的濃度為0.2mg/L、牛血清蛋白20mg/L；

3）不定芽增殖培養

把誘導的簇狀不定芽切成帶有5-8個不定芽的小塊，轉接到芽增殖培養基中，芽增殖培養基本培養基為改良MS，添加TDZ、IBA即吲哚丁酸、牛血清蛋白，pH為5.9-6.0，培養條件為：培養室溫度設定為23-25℃，光照時間13h，光照強度為50-55μmol/?O.s，培養30±2d，增殖出大量不定芽莖段；TDZ的濃度為1.5mg/L、IBA的濃度為0.1mg/L、牛血清蛋白的濃度為15mg/L；改良MS為MS培養基組成中有機成分比正常增加一倍，其它組分保持不變；

4）壯苗培養

把增殖出來的不定芽莖段切成長約2cm的莖段，接種到壯苗培養基中，壯苗培養基本培養基為MS，添加6-BA即6-芐氨基腺嘌呤、IBA即吲哚丁酸、牛血清蛋白，培養條件為：培養室溫度設定為23-25℃，光照時間13h，光照強度為50-55?μmol/?O.s，培養21±2d；6-BA濃度為1mg/L、IBA濃度為0.3mg/L、牛血清蛋白濃度為15mg/L；

5）分化苗生根培養

剪取經過壯苗培養的莖段，長2.5-3.5cm，接種到生根培養基中進行生根誘導，生根基本培養基為1/2?MS，添加NAA即萘乙酸、IBA即吲哚丁酸、牛血清蛋白，培養條件為：培養室溫度設定為23-25℃，光照時間13h，光照強度為50-55?μmol/?O.s，培養15±2d；NAA濃度為0.2mg/L、IBA濃度為0.1mg/L、牛血清蛋白濃度為15mg/L；

6）再生植株的移栽

對生根的莖段移栽到栽培基質前，擰松培養瓶蓋，在瓶內倒入少許無菌水，于室內煉苗3d，而后清洗掉根部粘連的培養基，移栽于混合培養基質中，進行常規栽培管理。

2.如權利要求1所述的長序榆高效再生體系的建立方法，其特征在于步驟1）-4）中的培養基中蔗糖的添加量為30g/L，步驟5）中蔗糖的添加量為2g/L，步驟1）-5）的培養基中瓊脂添加量均為4.8g/L。

3.如權利要求1所述的長序榆高效再生體系的建立方法，其特征在于步驟6）中混合培養基質由蛭石和珍珠巖混合而成，兩者的體積比為蛭石：珍珠巖=4:1。