[發明專利]一種β-乳球蛋白的抗原表位肽、完全抗原、抗體以及測定β-乳球蛋白殘留量的方法

有效

• 申請號: 202110602455.0
• 申請日: 2021-05-31
• 公開（公告）號: CN113549141B
• 公開（公告）日: 2023-03-28
• 發明（設計）人: 叢艷君;劉迪
• 申請（專利權）人: 北京工商大學
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C07K16/18;G01N33/68;G01N33/577
• 代理公司: 北京易捷勝知識產權代理有限公司 11613
• 代理人: 齊勝杰

本發明涉及一種β?乳球蛋白的抗原表位肽、完全抗原、抗體以及測定β?乳球蛋白殘留量的方法。抗原表位肽的氨基酸序列為CGAQALIVTQTMKGLDIQKVAGTWYS。測定β?乳球蛋白殘留量的方法為：S1：合成β?乳球蛋白作用表位肽。S2：將β?乳球蛋白作用表位肽制備為完全抗原。S3：制備單抗或多抗。S4：以步驟S3的單抗或多抗為一抗，采用間接競爭ELISA方法檢測不同蛋白酶水解β?乳球蛋白的水解液中β?乳球蛋白殘留量。本發明通過間接競爭ELISA方法實現β?乳球蛋白的測定，以β?乳球蛋白的AA12～37抗原表位肽作為免疫原，利用該免疫原制備測定所需的抗體。制備的抗體對β?乳球蛋白水解物中殘留的含有作用表位的肽段有極高的特異性，檢測更加準確。

技術領域

本發明屬于生物技術和食品技術領域，具體涉及一種β-乳球蛋白的抗原表位肽、完全抗原、抗體以及測定β-乳球蛋白殘留量的方法。

背景技術

牛乳是非常優質的蛋白來源，也是常見的過敏物質之一，其致敏性對嬰幼兒的身體健康造成了嚴重的影響。牛乳蛋白過敏通常在嬰兒期更為嚴重，會引起包括皮膚、胃腸道、呼吸道等的反應，甚至更嚴重的系統過敏反應或休克。

牛乳中蛋白含量豐富，每升牛乳含有約30-35克蛋白質，含有超過25種不同的蛋白質，從理論上講，任何一種蛋白質都有潛在致敏性。目前普遍認為酪蛋白、β-乳球蛋白及α-乳白蛋白是牛乳中主要的過敏原。而乳清中最重要的過敏原是β-乳球蛋白，占總乳蛋白的10％，以及α-乳白蛋白，占總乳蛋白的5％。

通過限制或改變飲食來預防嬰兒過敏性疾病早已被提出。但是，牛乳蛋白往往作為配料被添加到各種食品中，難以從飲食中消除。另外，對于處于骨骼生長期的兒童，牛乳是鈣的重要來源。為此，現有技術選擇向牛乳蛋白中添加蛋白酶，對致敏蛋白進行作用表位的水解。蛋白酶水解后的牛乳蛋白，其結構被破壞，成為分子量較小的多肽。然而，不同種類的蛋白酶對β-乳球蛋白的水解能力不同，仍然存在水解位點特異性不強，過敏原殘留量較高，水解物苦味較重等問題。因此，對水解后的牛乳進行抗原殘留量檢測必不可少。

目前牛乳中β-乳球蛋白的檢測方法包括聚合酶鏈反應(PCR)檢測方法、色譜檢測方法以及免疫學檢測方法。

PCR檢測方法具有高特異性和敏感性，但是存在一些不足，特別是在食品中添加蛋白質時，很難將核酸檢測結果準確換算成蛋白質含量，這使得PCR的方法不適用于過敏原的評估和管理。此外，PCR檢測方法主要用于檢測核酸含量高的食品，然而，牛奶并中沒有與過敏原相關的DNA。

色譜學檢測方法包括高效液相色譜法、超高效液相色譜法及液相色譜-質譜聯用法，但是色譜質譜的儀器價格高昂，前處理復雜繁瑣，成本高昂。

ELISA是食品工業和政府食品檢測機構最常用的方法，具有特異性強、靈敏度高、成本低、操作簡單、高通量、速度快等優點。根據ELISA檢測的類型，可分為間接競爭型ELISA和三明治型ELISA，其中間接競爭型ELISA更適合于檢測分子或小分子。當β-乳球蛋白被水解破壞成小片段后，間接競爭型ELISA的檢測結果更為準確。但是，對于存在交叉過敏反應的過敏原，即對于存在相似作用表位的過敏原間，ELISA法常出現假陽性。

因此，需要提供一種能夠精準、快速檢測牛乳過敏原殘留量的檢測方法，以篩選出能夠有效降低過敏原致敏性的蛋白酶，降低牛乳中過敏原的含量。

發明內容

(一)要解決的技術問題

為了解決現有技術中存在的水解后的牛乳中β-乳球蛋白抗原的殘留檢測困難的問題，本發明提供一種β-乳球蛋白的抗原表位肽、完全抗原、抗體以及測定β-乳球蛋白殘留量的方法。

(二)技術方案

為了達到上述目的，本發明采用的主要技術方案包括：