[發明專利]一種檢測農藥殘留的膠體金卡及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202110602141.0
• 申請日: 2021-05-31
• 公開（公告）號: CN113325180A
• 公開（公告）日: 2021-08-31
• 發明（設計）人: 游冬;梁如中;周麗;鄒曉蘭;李林
• 申請（專利權）人: 無錫中德伯爾生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/58
• 分類號: G01N33/58;G01N33/558;G01N33/577;G01N33/532;G01N33/531;G01N33/53
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

1.一種檢測農藥殘留的膠體金卡，其特征在于，所述膠體金卡包括底板和在底板上依次搭接的樣品墊、金結合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊；

所述硝酸纖維素膜上設置有包被農藥抗原的檢測線和包被二抗的質控線；

所述金結合墊含有膠體金標記的農藥抗體、蔗糖、十二水合磷酸氫二鈉、牛血清白蛋白、酪朊酸鈉、海藻糖和聚乙二醇。

2.根據權利要求1所述的膠體金卡，其特征在于，所述樣品墊上含有三羥甲基氨基甲烷、牛血清白蛋白、脂肪醇聚氧乙烯、吐溫和聚乙烯吡咯烷酮；

優選地，所述檢測線上還含有氯化鈉、海藻糖和聚氧乙烯十二烷基醚。

3.根據權利要求1或2所述的膠體金卡，其特征在于，所述農藥抗體包括毒死蜱抗體、甲萘威抗體、三唑磷抗體、三唑酮抗體、涕滅威抗體、氟蟲腈抗體、多效唑抗體、吡蟲啉抗體、噠螨靈抗體或百菌清抗體中的任意一種；

優選地，所述農藥抗體為鼠源農藥IgG抗體；

優選地，所述農藥抗原包括毒死蜱抗原、甲萘威抗原、三唑磷抗原、三唑酮抗原、涕滅威抗原、氟蟲腈抗原、多效唑抗原、吡蟲啉抗原、噠螨靈抗原或百菌清抗原中的任意一種；

優選地，所述二抗包括羊抗鼠IgG抗體或兔抗鼠IgG抗體。

4.一種如權利要求1-3任一項所述的檢測農藥殘留的膠體金卡的制備方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

(1)使用含有氯化鈉、海藻糖、聚氧乙烯和十二烷基醚的劃膜液在硝酸纖維素膜進行劃膜，制作檢測線和質控線，并在檢測線上包被農藥抗原，在質控線上包被二抗，得到具有檢測線和質控線的硝酸纖維素膜；

使用含有蔗糖、十二水合磷酸氫二鈉、牛血清白蛋白、酪朊酸鈉、海藻糖和聚乙二醇的金結合墊處理液浸泡玻璃纖維，進行干燥處理，并在玻璃纖維上噴涂膠體金標記的農藥抗體，得到金結合墊；

使用含有三羥甲基氨基甲烷、牛血清白蛋白、脂肪醇聚氧乙烯、吐溫和聚乙烯吡咯烷酮的樣品墊處理液浸泡玻璃纖維，進行干燥處理，得到樣品墊；

(2)將樣品墊、金結合墊、具有檢測線和質控線的硝酸纖維素膜和吸水墊依次搭接，并粘合在底板上，得到所述檢測農藥殘留的膠體金卡。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，步驟(1)所述劃膜液含有0.05～0.2M氯化鈉、1％～5％海藻糖和0.02％～0.05％聚氧乙烯十二烷基醚；

優選地，步驟(1)所述金結合墊處理液含有2％～8％蔗糖、0.05～0.2M十二水合磷酸氫二鈉、0.5％～5％牛血清白蛋白、0.5％～5％酪朊酸鈉、1％～3％海藻糖和0.5％～3％聚乙二醇；

優選地，步驟(1)所述樣品墊處理液含有0.02～0.2M三羥甲基氨基甲烷、0.5％～5％牛血清白蛋白、0.1％～1.5％脂肪醇聚氧乙烯、0.1％～1.5％吐溫和0.25％～1.5％聚乙烯吡咯烷酮。

6.根據權利要求4或5所述的方法，其特征在于，步驟(2)所述搭接為重疊2～3mm。

7.根據權利要求4-6任一項所述的方法，其特征在于，所述方法還包括制備膠體金溶液的步驟；

優選地，所述膠體金溶液的制備方法為使用檸檬酸三鈉還原氯金酸制備膠體金溶液；

優選地，所述膠體金溶液中膠體金的粒徑為35～45nm。

8.根據權利要求4-7任一項所述的方法，其特征在于，所述方法還包括制備膠體金標記的農藥抗體的步驟；

優選地，所述膠體金標記的農藥抗體的制備方法為使用K₂CO₃溶液調節膠體金溶液pH，隨后將膠體金溶液與農藥抗體混合進行標記，得到膠體金標記的農藥抗體；

優選地，所述K₂CO₃溶液的濃度為0.2～0.4M；

優選地，所述膠體金溶液和農藥抗體的配比為1mL:(5～8)μg。