[發明專利]一種微液滴生物傳感器的構建方法及其應用

在審

• 申請號: 202110601490.0
• 申請日: 2021-05-31
• 公開（公告）號: CN113337573A
• 公開（公告）日: 2021-09-03
• 發明（設計）人: 劉龍;陳堅;呂雪芹;堵國成;李江華;劉延峰;孫國運
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12Q1/34
• 分類號: C12Q1/34;G01N21/64
• 代理公司: 蘇州市中南偉業知識產權代理事務所(普通合伙) 32257
• 代理人: 王玉仙

1.一種微液滴生物傳感器的構建方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)將產酶菌培養并稀釋至濃度為3-10百萬個菌/mL，將稀釋后的產酶菌包裹進微液滴中，培養，得到含有產酶菌的微液滴，其中，所述產酶菌為可表達己丁二糖脫乙酰酶的菌株；

(2)向檢測菌培養液中加入N-乙酰氨基葡萄糖，得到檢測菌溶液，其中，所述檢測菌為只可以利用氨基葡萄糖激活生產熒光蛋白的菌株；

(3)將步驟(2)的檢測菌溶液注射入步驟(1)的含有產酶菌的微液滴中培養，得到所述微液滴生物傳感器，其中，按照單個微液滴中所述檢測菌和產酶菌的數量比為1:0.8-1.2注射檢測菌。

2.根據權利要求1所述的構建方法，其特征在于：所述微液滴的直徑為20-50μm。

3.根據權利要求1所述的構建方法，其特征在于：所述產酶菌為枯草芽孢桿菌。

4.根據權利要求1所述的構建方法，其特征在于：所述檢測菌為枯草芽孢桿菌。

5.根據權利要求1所述的構建方法，其特征在于，所述檢測菌由以下步驟構建得到：

敲除Bacillus subtilis 168的基因gamR、nagB和gamA，將敲除后的基因轉入質粒pHTcsg2，得到重組表達載體，轉入宿主細胞，得到所述檢測菌。

6.根據權利要求1所述的構建方法，其特征在于：在步驟(1)中，稀釋后的產酶菌包裹進微液滴后培養8-36h。

7.根據權利要求1所述的構建方法，其特征在于：在步驟(2)中，所述檢測菌溶液中所述N-乙酰氨基葡萄糖的濃度為8-12g/L。

8.根據權利要求1所述的構建方法，其特征在于：在步驟(3)中，培養18-30h。

9.一種權利要求1-8任一項所述的構建方法構建的微液滴生物傳感器。

10.一種權利要求9所述的微液滴生物傳感器在篩選己丁二糖脫乙酰酶的重組菌株或突變體，或在氨基葡萄糖高通量檢測中的應用，其特征在于：根據所述微液滴生物傳感器的熒光強度進行高通量篩選或檢測。