[發明專利]一種桔梗中磷脂類成分定性分析及其C=C定位的方法

有效

• 申請號: 202110600668.X
• 申請日: 2021-05-31
• 公開（公告）號: CN113295799B
• 公開（公告）日: 2023-09-22
• 發明（設計）人: 季申;胡青;蘭嵐;周恒;黃衛珍;毛秀紅;苗水;潘惠勤;李雯婷;袁佳佳
• 申請（專利權）人: 上海市食品藥品檢驗研究院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/30;G01N30/32;G01N30/34;G01N30/72;G01N30/74;G01N30/86;G01N21/75
• 代理公司: 上海上谷知識產權代理有限公司 31342
• 代理人: 蔡繼清

本發明公開了一種桔梗中磷脂類成分定性分析及其C＝C定位的方法，采用Matyash方法提取桔梗中的磷脂類成分，HILIC柱進行色譜分離，并以超高效液相色譜?高分辨質譜系統串聯在線PB光化學反應器組成磷脂定性及C＝C定位系統，通過三步實驗對桔梗樣品中磷脂類成分進行精準分析。本發明在桔梗樣品中共分析鑒定出包括C＝C異體在內的180個磷脂分子，可為桔梗的物質基礎研究及全面質量控制拓寬思路并提供技術支撐。

技術領域

本發明屬于中藥分析檢測領域，具體涉及桔梗中磷脂類成分定性分析及其C＝C定位的方法。

背景技術

桔梗為桔梗科植物桔梗Platycodon?grandiflorum(Jacq.)A.DC.的干燥根，具有宣肺、利咽、祛痰、排膿等功效。桔梗既是常用的大宗藥材，又是許多亞洲國家藥食兩用的功能性食品，伴隨著市場需求量的增大，不同來源的桔梗品質參差不齊，對其質量控制的研究尤為必要。

桔梗主要含有三萜皂苷類、黃酮類、酚酸類、聚炔類、多糖類等成分，其中皂苷類化合物被認為是其主要藥效成分。目前完善的桔梗質量評價體系仍然缺失，例如2020年版《中國藥典》僅對桔梗皂苷D有明確的含量控制要求，監測目標單一。單純依賴通行的質量檢測方法檢測個別化學成分的含量變化不足以表明桔梗藥材質量的真正變化。因此，完善桔梗的物質基礎和化學表征研究將有助于整體和系統地提高桔梗質量的可控性，并對科學標準的制定有著指導意義。

目前已有文獻對桔梗的物質基礎進行了研究，但是，對于桔梗中化學成分的表征還不夠全面，例如，一些微量成分可能未完全暴露，且質譜圖中的一些高豐度成分仍未被鑒定等。我們通過UPLC/IM-QTOF-MS技術對桔梗進行全成分分析過程中，首次發現了磷脂類化合物，且其在質譜圖中具有非常高的豐度。研究表明，磷脂作為生物膜的主要成分具有廣泛的生物活性。由于頭部基團、骨架和脂肪酰基鏈的不同組合，以及C＝C和sn位置不同，磷脂在生物樣本中具有復雜的分子結構，這使得磷脂的分離和鑒定仍面臨諸多挑戰。結構決定功能，特別是C＝C的引入對磷脂的結構和功能產生顯著影響。而在以往研究中，針對于中藥或食品中磷脂類化合物的鑒定多局限于頭部基團和脂肪酸鏈的鑒定，而關于其不飽和脂肪酸鏈上的C＝C雙鍵位置鑒定的研究較少。

因此，有必要對桔梗中磷脂類化合物進行研究，進一步闡明其精細結構，為全面提高桔梗的質量控制及藥用和營養價值評價提供技術支撐。

發明內容

為了鑒定桔梗中的磷脂類成分，并對其不飽和脂肪酸鏈上的C＝C位置進行定位，本發明將采用Matyash方法提取桔梗中的磷脂類成分，HILIC柱進行色譜分離，并以超高效液相色譜-高分辨質譜系統串聯在線Paternò-Büchi(PB)光化學反應器(ΩAnalzer)組成磷脂定性及C＝C定位系統，通過三步實驗對桔梗樣品中磷脂類成分進行精準分析。

本發明提供一種桔梗中磷脂類成分定性分析及其C＝C定位的方法，包括以下步驟：

步驟S1、采用Matyash方法提取桔梗中的磷脂類成分作為分析樣品；

步驟S2、第一次進樣所述分析樣品，經超高效液相色譜-高分辨質譜后分離為磷脂酰乙醇胺、溶血磷脂酰乙醇胺、磷脂酰膽堿和溶血磷脂酰膽堿，同時得到ESI⁺MS^E及ESI^-MS^E數據，推測出其分子式；

步驟S2、根據ESI^-MS^E數據得到的母離子信息，第二次進樣所述分析樣品，采集ESI^-MS/MS數據，判斷磷脂上的脂肪酰基鏈組成；