[發(fā)明專利]一種桔梗中磷脂類成分定性分析及其C=C定位的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110600668.X
• 申請(qǐng)日: 2021-05-31
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113295799B
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-09-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 季申;胡青;蘭嵐;周恒;黃衛(wèi)珍;毛秀紅;苗水;潘惠勤;李雯婷;袁佳佳
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海市食品藥品檢驗(yàn)研究院
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/06;G01N30/30;G01N30/32;G01N30/34;G01N30/72;G01N30/74;G01N30/86;G01N21/75
• 代理公司: 上海上谷知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31342
• 代理人: 蔡繼清

1.一種通過(guò)對(duì)磷脂類成分定性分析及其C＝C定位控制桔梗質(zhì)量的方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟S1、采用Matyash方法提取桔梗中的磷脂類成分作為分析樣品，其中，所述Matyash方法提取桔梗中的磷脂類成分包括步驟：取桔梗供試品粉末50mg，加入0.3mL甲醇和1mLMTBE，超聲提取10min，加入0.25mL水誘導(dǎo)相分離，在14000rpm下離心10min后，收集上部有機(jī)層，剩余殘?jiān)貜?fù)提取一遍，合并有機(jī)相得到所述分析樣品；

步驟S2、第一次進(jìn)樣所述分析樣品，經(jīng)超高效液相色譜-高分辨質(zhì)譜后分離為磷脂酰乙醇胺、溶血磷脂酰乙醇胺、磷脂酰膽堿和溶血磷脂酰膽堿，同時(shí)得到ESI⁺MS^E及ESI^-MS^E數(shù)據(jù)，推測(cè)出其分子式，

其中，所述高分辨質(zhì)譜條件如下：

離子源：電噴霧；

毛細(xì)管電壓：2.0kV；

錐孔電壓：40V；

源溫度：120℃；

霧化氣溫度：450℃；

霧化氣流速：800L/h；

錐孔氣流速：50L/h；

步驟S3、根據(jù)ESI^-MS^E數(shù)據(jù)得到的母離子信息，第二次進(jìn)樣所述分析樣品，采用ESI^-MS/MS模式，碰撞能分別設(shè)定為：磷脂酰乙醇胺35eV，溶血磷脂酰乙醇胺和溶血磷脂酰膽堿30eV，磷脂酰膽堿38eV，采集ESI^-MS/MS數(shù)據(jù)，判斷磷脂上的脂肪酰基鏈組成；

步驟S4、開(kāi)啟串聯(lián)在所述超高效液相色譜和高分辨質(zhì)譜之間的PB光化學(xué)微型反應(yīng)器，根據(jù)ESI⁺MS^E數(shù)據(jù)獲得的母離子信息，第三次進(jìn)樣所述分析樣品，采用ESI⁺MS/MS模式，碰撞能分別設(shè)定為：磷脂酰乙醇胺35eV，溶血磷脂酰乙醇胺和溶血磷脂酰膽堿30eV，磷脂酰膽堿38eV，所述分析樣品與所述光化學(xué)微型反應(yīng)器中的流動(dòng)相中的丙酮進(jìn)行PB反應(yīng)，采集[M+58]⁺的ESI⁺MS/MS數(shù)據(jù)；根據(jù)[M+58]⁺的ESI⁺MS^E獲得△26Da的診斷離子對(duì)，獲得所述磷脂類成分的脂肪酰基鏈上C＝C的數(shù)量和位置如表4所示；

表4

所述超高效液相色譜條件如下：

色譜柱：ACQUITYBEH?HILIC?column?2.1mm×100mm,1.7μm；

流動(dòng)相A為：10mmol/L乙酸銨水溶液；

流動(dòng)相B為：50/50丙酮/乙腈(v/v)；

柱溫：30℃；

流速：0.4ml/min；

進(jìn)樣量：2μL；

洗脫方式：梯度洗脫；

所述梯度洗脫程序如下：

2.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的方法，其特征在于，從ESI⁺MS^E數(shù)據(jù)及ESI^-MS^E數(shù)據(jù)獲得母離子信息、磷脂分子的特征碎片、中性丟失片段和加和離子的精確分子量中的一種或幾種。

3.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的方法，其特征在于，步驟S2中，采用ESI⁺MS^E模式，低碰撞能量為6eV，高碰撞能量ramp為15-40eV。

4.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的方法，其特征在于，所述PB光化學(xué)微型反應(yīng)器中紫外光的波長(zhǎng)為190～260nm。