[發明專利]一種Cap2結構5′帽子類似物及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202110600577.6
• 申請日: 2020-08-20
• 公開（公告）號: CN113201566A
• 公開（公告）日: 2021-08-03
• 發明（設計）人: 胡勇;張苗苗;洪丹;胡迅
• 申請（專利權）人: 深圳市瑞吉生物科技有限公司
• 主分類號: C12P19/34
• 分類號: C12P19/34;C07H21/02
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 張夢澤

1.一種Cap2結構5'帽子類似物，所述Cap2結構5'帽子類似物的分子式為：m7G(5')ppp(5')(2'OMeU)p(2'OMeA)。

2.權利要求1所述的Cap2結構5'帽子類似物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)將2'-O-Methyl-UTP溶解在無RNA酶水中，再與磷酸水解酶、2×ReactionBuffer混合后進行孵育，得到2'-O-Methyl-UDP；

2)將所述步驟1)得到的2'-O-Methyl-UDP溶解在無RNA酶水中，再與7-Methylguanosine、鳥苷轉移酶、2×Reaction Buffer混合后進行孵育，得到m7G(5')ppp(5')(2'OMeU)；

3)將所述步驟2)得到的m7G(5')ppp(5')(2'OMeU)溶解在無RNA酶水中，與T4RNALigase1混合后，再與2'-O-Methyl-ATP混合，再與2×T4 RNA Ligase ReactionBuffer混合后進行孵育，得到Cap2結構5'帽子類似物。

3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述步驟1)中2'-O-Methyl-UTP的物質的量與無RNA酶水的體積比為1～30mmol:14μL。

4.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述步驟1)中無RNA酶水與磷酸水解酶、2×ReactionBuffer的體積比為14:1:15。

5.根據權利要求2或4所述的制備方法，其特征在于，所述磷酸水解酶的酶活為50000U；

所述2×ReactionBuffer的組分包括：50mM Tris-HCl、5mM KCl、1mM MgCl₂和1mM DTT；所述2×Reaction Buffer的pH值為8。

6.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述步驟1)～3)孵育的溫度分別為37℃，所述孵育的時間分別為1h。

7.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述步驟2)無RNA酶水與7-Methylguanosine、鳥苷轉移酶、2×Reaction Buffer的體積比為11:10:1:22。

8.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟3)無RNA酶水與T4 RNALigase 1、2×T4 RNA Ligase Reaction Buffer的體積比為11:1:22。

9.根據權利要求2或8所述的制備方法，其特征在于，所述2×T4 RNA Ligase ReactionBuffer的組分包括：60mM Tris-HCl、20mM MgCl₂、20mM DTT和2mMATP；所述T4 RNALigase 1的酶活為10000U。

10.權利要求1所述Cap2結構5'帽子類似物或者權利要求2～9任意一項所述制備方法制備得到的Cap2結構5'帽子類似物在mRNA合成中的應用。