[發(fā)明專(zhuān)利]一種無(wú)菌菠蘿外植體制備方法及其農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110599212.6
• 申請(qǐng)日: 2021-05-31
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113512523A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-10-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 岳晶晶;賈海鳳;明瑞光
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 福建農(nóng)林大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12N5/04
• 分類(lèi)號(hào): C12N5/04;C12N15/82;A01H4/00;A01H5/00;A01H6/22
• 代理公司: 廈門(mén)智慧呈睿知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 35222
• 代理人: 楊唯

1.一種無(wú)菌菠蘿外植體的制備方法，其特征在于，包括：將菠蘿植株消毒后切塊，并放在菠蘿不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進(jìn)行不定芽的誘導(dǎo)，得到的不定芽繼續(xù)培養(yǎng)成無(wú)菌菠蘿植株，從無(wú)菌菠蘿植株基部切下莖圓片，作為無(wú)菌菠蘿外植體。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的無(wú)菌菠蘿外植體的制備方法，其特征在于，所述菠蘿植株為幼嫩的菠蘿植株；將其沖洗干凈后在無(wú)菌環(huán)境中對(duì)其進(jìn)行消毒處理。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的無(wú)菌菠蘿外植體的制備方法，其特征在于，所述菠蘿植株的消毒處理步驟包括：先用75％的酒精消毒30秒，無(wú)菌水清洗3～5次，再用0.1％的HgCl₂消毒6-8min，無(wú)菌水清洗5次以上，每次清洗時(shí)間大于1min。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的無(wú)菌菠蘿外植體的制備方法，其特征在于，經(jīng)消毒處理后的菠蘿植株用無(wú)菌濾紙吸干水分，并將消毒好的菠蘿植株切成0.4～0.8cm的塊狀，放置在菠蘿不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基3B0.2N上，26℃溫度條件下，光照培養(yǎng)20～30天，獲得菠蘿不定芽。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的無(wú)菌菠蘿外植體的制備方法，其特征在于，將得到的不定芽轉(zhuǎn)移至MS液體培養(yǎng)基上，26℃溫度條件下，光照繼續(xù)培養(yǎng)20～30天，獲得無(wú)菌菠蘿幼株；將菠蘿幼株繼續(xù)轉(zhuǎn)移至液體PM培養(yǎng)基上，26℃溫度條件下，光照繼續(xù)培養(yǎng)14天，獲得無(wú)菌菠蘿植株。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的無(wú)菌菠蘿外植體的制備方法，其特征在于，將得到的無(wú)菌菠蘿植株，在超凈臺(tái)中從基部開(kāi)始橫切2-4mm厚度的莖圓片2-3片，作為無(wú)菌菠蘿外植體。

7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的無(wú)菌菠蘿外植體的制備方法，其特征在于，所述菠蘿不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基3B0.2N包括如下質(zhì)量濃度的組分：

MS 4.43g/L，蔗糖30g/L，植物凝膠3g/L，6-BA 3mg/L，NAA 0.2mg/L；

其pH為5.6-5.8。

8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的無(wú)菌菠蘿外植體的獲得方法，其特征在于，液體培養(yǎng)基MS包括如下質(zhì)量濃度的組分：

MS 4.43g/L，蔗糖30g/L，植物凝膠3g/L；

其pH為5.6-5.8；

液體PM培養(yǎng)基包括如下質(zhì)量濃度的組分：

MS 4.43g/L，蔗糖30g/L，6-BA 2mg/L；

其pH為5.6-5.8。