[發明專利]一種特異性識別PD-L1的納米抗體及其應用

有效

• 申請號: 202110596814.6
• 申請日: 2021-05-31
• 公開（公告）號: CN113045662B
• 公開（公告）日: 2021-08-13
• 發明（設計）人: 張廣華;劉云;陸陽;區文彩;阮月敏
• 申請（專利權）人: 西寶生物科技（上海）股份有限公司
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C07K16/46;C12N15/13;C12N15/70;C12N1/21;C12N7/01;G01N33/68;G01N33/543;A61K39/395;A61K47/68;A61P35/00;A61P31/18;A61P31/20;A61P31/1
• 代理公司: 上海三方專利事務所(普通合伙) 31127
• 代理人: 吳瑋

本發明涉及單克隆抗體技術領域，具體來說是一種特異性識別PD?L1的納米抗體及其應用，所述納米抗體的互補決定區包括如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列CDR1、SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列CDR2和SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列CDR3。本發明所提供的一種特異性識別PD?L1的納米抗體，所述的納米抗體對于PD?L1具有良好的特異性，與其它蛋白的交叉反應性很低。本發明的納米抗體可靈敏檢測PD?L1，重復性好，結果穩定；利用所述的納米抗體，還可以可制備方便、快速且準確地檢測PD?L1的試劑盒。

技術領域

本發明涉及單克隆抗體技術領域，具體來說是一種特異性識別PD-L1的納米抗體及其應用。

背景技術

PD-1的臨床轉化研究主要是通過研發可以封閉PD-1或其配體的抗體進行。這些抗體有的已經應用于臨床I期和Ⅱ期實驗，有的還在動物模型中進行實驗。據文獻報道，這些抗體主要應用于：晚期癌癥治療，例如轉移性黑色素瘤、腎癌等；慢性和長期病毒感染，比如脈絡叢腦膜炎病毒，HIV感染等。另外，對于自身免疫病中PD-1及其配體的異常表達也有報道，激活PD-1途徑以治療自身免疫病也在討論的范圍內。目前已有的進入臨床實驗的封閉PD-1信號通路的抗體均是針對癌癥治療的，且大多數都是由藥物公司研發。

另外，上個世紀90年代，在駝類體內發現天然缺失輕鏈，僅由重鏈組成的抗體。重鏈單域抗體可直接識別抗原，其蛋白質大小約為15-17kD，由于分子量小，因此又稱為納米抗體。重鏈抗體大約含130個氨基酸，具有較小的分子質量和較簡單的結構，是可獲得的較小的與抗原結合的單位。已有研究表明，納米抗體相對于傳統抗體具有更高的熱穩定性，更好的折疊能力以及組織侵入性。文獻表明，有些納米抗體可以通過血腦屏障，這一特性對于藥物輸送意義重大。且其CDR3區比傳統抗體長，更容易與凹陷結構結合，因此對于在封閉酶的活性方面很有優勢。此外重鏈抗體還可以其他蛋白共同表達組成具有雙特異性或者多種功能的融合蛋白。重鏈抗體與熒光蛋白結合極大地推動了分子成像技術的發展，進而推動了腫瘤的個性化治療及藥物研發領域的進步。近年來，國內外已構建了很多駝源天然單域重鏈抗體噬菌體庫，也有半合成駝源單域重鏈抗體噬菌體庫的建立，其展示的納米抗體在癌癥治療、疫苗研發等領域都有重要應用。

發明內容

本發明的目的在于，通過使用合成法成功構建了噬菌體展示的納米抗體文庫，隨后，以PD-L1胞外域蛋白為抗原篩選抗體，最終得到特異性結合PD-L1的抗體。納米抗體本身的分子量較小，具有免疫原性小，高溫穩定性等優點，使得針對PD-L1胞外域蛋白的納米抗體相對已有的傳統抗體具有較大的優勢和更廣泛的應用。

為了實現上述目的，在本發明的第一方面，提供一種特異性識別PD-L1的納米抗體，所述納米抗體的互補決定區包括如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列CDR1、SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列CDR2和SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列CDR3。

進一步的，所述納米抗體的骨架區包括如SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列FR1、SEQID NO.6所示的氨基酸序列FR2、SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列FR3和SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列FR4。

進一步的，所述納米抗體的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本發明還包括一種多核苷酸，其編碼上述納米抗體。

進一步的，還包括一種表達載體，所述表達載體中包括上述多核苷酸。

優選的，所述表達載體優選為pET28a，上述多核苷酸可通過分子克隆技術克隆至pET28a中進行表達。

本發明還提供一種宿主細胞(為非繁殖細胞)，該宿主細胞中含有上述的表達載體或其基因組中整合有上述的多核苷酸。

在本發明的另一方面，提供一種產生納米抗體的方法，包括：培養上述的宿主細胞，使之表達上述的納米抗體。