[發(fā)明專利]靶向沉默辣椒疫霉纖維素合酶3的植物表達(dá)載體及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110596400.3
• 申請(qǐng)日: 2021-05-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113151281A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-07-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉西莉;王治文;鐘珊;高翔;李瑜;張博瑞;張思聰;李騰蛟
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/113
• 分類號(hào): C12N15/113;C12N15/82;A01H5/00;A01H6/82
• 代理公司: 北京惟誠(chéng)致遠(yuǎn)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11536
• 代理人: 王慧鳳

1.一種靶向辣椒疫霉纖維素合酶3基因并使其沉默的DNA片段，其特征在于，所述DNA片段的序列為序列表中序列1或者序列表中序列2。

2.一種靶向辣椒疫霉纖維素合酶3基因并使其沉默的植物表達(dá)載體，其特征在于，是由SEQ ID No.1或SEQ ID No.2所示的核酸序列分別以正、反向兩次插入到對(duì)應(yīng)的植物表達(dá)載體構(gòu)成；優(yōu)選的，所述植物表達(dá)載體是將如式(I)所示編碼基因克隆到出發(fā)載體，構(gòu)成可表達(dá)靶向辣椒疫霉纖維素合酶3基因并使其沉默的具有反向互補(bǔ)二級(jí)結(jié)構(gòu)的RNA分子的重組表達(dá)載體；SEQ正向-X-SEQ反向(I)；式(I)中，所述SEQ正向的序列為序列表中序列1或者序列表中序列2；所述SEQ反向的序列與所述SEQ正向的序列反向互補(bǔ)；所述X是所述SEQ正向與所述SEQ反向之間的間隔序列，所述X與所述SEQ正向及所述SEQ反向均不互補(bǔ)。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的植物表達(dá)載體，其特征在于，所述出發(fā)載體為pEarlyGate100，式(I)中，X為UBC基因內(nèi)含子或植物丙酮酸磷酸激酶基因內(nèi)含子，所述UBC基因內(nèi)含子序列如序列表中序列3的自5’端第3307-3378位核苷酸序列所示，所述物丙酮酸磷酸激酶基因內(nèi)含子如序列表中序列4的自5’端第3467-3845位核苷酸序列所示。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的植物表達(dá)載體，其特征在于，所述植物表達(dá)載體的構(gòu)建方法為將序列1所述的片段先正向插入pENTR1a質(zhì)粒得到重組質(zhì)粒pENTR1a-5’Ces，再將序列反向插入pENTR1a-5’Ces載體的UBC基因內(nèi)含子的3’端，將得到的重組質(zhì)粒再利用LR反應(yīng)，將序列1所示片段正向、UBC基因內(nèi)含子和序列1所示片段反向依次串聯(lián)的片段轉(zhuǎn)入植物表達(dá)載體pEarlyGate100中，得到靶向辣椒疫霉纖維素合酶3基因并使其沉默的植物表達(dá)載體。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的植物表達(dá)載體，其特征在于，所述植物表達(dá)載體的序列優(yōu)選為序列表中序列3。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的植物表達(dá)載體，其特征在于，所述植物表達(dá)載體的構(gòu)建方法為將序列2所述的片段先正向插入pHANNIBAL質(zhì)粒得到重組質(zhì)粒pHANNIBAL-5’Ces，再將序列反向插入pHANNIBAL-5’Ces載體的植物丙酮酸磷酸激酶基因內(nèi)含子的3’端，將得到的重組質(zhì)粒再利用LR反應(yīng)，將序列2所示片段正向、植物丙酮酸磷酸激酶基因內(nèi)含子和序列2所示片段反向依次串聯(lián)的片段轉(zhuǎn)入植物表達(dá)載體pEarlyGate100中，得到靶向辣椒疫霉纖維素合酶3基因并使其沉默的植物表達(dá)載體。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的植物表達(dá)載體，其特征在于，所述植物表達(dá)載體的序列優(yōu)選為序列表中序列4。

8.權(quán)利要求1所述的DNA片段或權(quán)利要求2-7中任意一項(xiàng)所述的植物表達(dá)載體在干擾辣椒疫霉纖維素合酶3基因表達(dá)上的應(yīng)用。

9.權(quán)利要求1所述的DNA片段或權(quán)利要求2-7中任意一項(xiàng)所述的植物表達(dá)載體在防治辣椒疫霉所引起植物病害上的應(yīng)用。

10.利用權(quán)利要求2-7中任意一項(xiàng)所述的植物表達(dá)載體防治辣椒疫霉所引起植物病害的方法，其特征在于將含有權(quán)利要求2-7中任意一項(xiàng)所述的植物表達(dá)載體的溶液或試劑直接噴灑于植物的各種組織。