[發明專利]靶向沉默辣椒疫霉纖維素合酶3的植物表達載體及其應用

在審

• 申請號: 202110596400.3
• 申請日: 2021-05-30
• 公開（公告）號: CN113151281A
• 公開（公告）日: 2021-07-23
• 發明（設計）人: 劉西莉;王治文;鐘珊;高翔;李瑜;張博瑞;張思聰;李騰蛟
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/82;A01H5/00;A01H6/82
• 代理公司: 北京惟誠致遠知識產權代理事務所(普通合伙) 11536
• 代理人: 王慧鳳

1.一種靶向辣椒疫霉纖維素合酶3基因并使其沉默的DNA片段，其特征在于，所述DNA片段的序列為序列表中序列1或者序列表中序列2。

2.一種靶向辣椒疫霉纖維素合酶3基因并使其沉默的植物表達載體，其特征在于，是由SEQ ID No.1或SEQ ID No.2所示的核酸序列分別以正、反向兩次插入到對應的植物表達載體構成；優選的，所述植物表達載體是將如式(I)所示編碼基因克隆到出發載體，構成可表達靶向辣椒疫霉纖維素合酶3基因并使其沉默的具有反向互補二級結構的RNA分子的重組表達載體；SEQ正向-X-SEQ反向(I)；式(I)中，所述SEQ正向的序列為序列表中序列1或者序列表中序列2；所述SEQ反向的序列與所述SEQ正向的序列反向互補；所述X是所述SEQ正向與所述SEQ反向之間的間隔序列，所述X與所述SEQ正向及所述SEQ反向均不互補。

3.根據權利要求2所述的植物表達載體，其特征在于，所述出發載體為pEarlyGate100，式(I)中，X為UBC基因內含子或植物丙酮酸磷酸激酶基因內含子，所述UBC基因內含子序列如序列表中序列3的自5’端第3307-3378位核苷酸序列所示，所述物丙酮酸磷酸激酶基因內含子如序列表中序列4的自5’端第3467-3845位核苷酸序列所示。

4.根據權利要求3所述的植物表達載體，其特征在于，所述植物表達載體的構建方法為將序列1所述的片段先正向插入pENTR1a質粒得到重組質粒pENTR1a-5’Ces，再將序列反向插入pENTR1a-5’Ces載體的UBC基因內含子的3’端，將得到的重組質粒再利用LR反應，將序列1所示片段正向、UBC基因內含子和序列1所示片段反向依次串聯的片段轉入植物表達載體pEarlyGate100中，得到靶向辣椒疫霉纖維素合酶3基因并使其沉默的植物表達載體。

5.根據權利要求4所述的植物表達載體，其特征在于，所述植物表達載體的序列優選為序列表中序列3。

6.根據權利要求3所述的植物表達載體，其特征在于，所述植物表達載體的構建方法為將序列2所述的片段先正向插入pHANNIBAL質粒得到重組質粒pHANNIBAL-5’Ces，再將序列反向插入pHANNIBAL-5’Ces載體的植物丙酮酸磷酸激酶基因內含子的3’端，將得到的重組質粒再利用LR反應，將序列2所示片段正向、植物丙酮酸磷酸激酶基因內含子和序列2所示片段反向依次串聯的片段轉入植物表達載體pEarlyGate100中，得到靶向辣椒疫霉纖維素合酶3基因并使其沉默的植物表達載體。

7.根據權利要求6所述的植物表達載體，其特征在于，所述植物表達載體的序列優選為序列表中序列4。

8.權利要求1所述的DNA片段或權利要求2-7中任意一項所述的植物表達載體在干擾辣椒疫霉纖維素合酶3基因表達上的應用。

9.權利要求1所述的DNA片段或權利要求2-7中任意一項所述的植物表達載體在防治辣椒疫霉所引起植物病害上的應用。

10.利用權利要求2-7中任意一項所述的植物表達載體防治辣椒疫霉所引起植物病害的方法，其特征在于將含有權利要求2-7中任意一項所述的植物表達載體的溶液或試劑直接噴灑于植物的各種組織。