[發明專利]一種透明質酸檢測試劑盒及其方法

在審

• 申請號: 202110595457.1
• 申請日: 2021-05-29
• 公開（公告）號: CN113433064A
• 公開（公告）日: 2021-09-24
• 發明（設計）人: 靳曉黎;孟琛;孫小芳
• 申請（專利權）人: 北京華宇億康生物工程技術有限公司
• 主分類號: G01N21/01
• 分類號: G01N21/01;G01N21/31
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種檢測透明質酸的試劑盒及其方法。本發明通過將HABP包被于膠乳微球上，并利用封閉劑對試劑盒進行封閉后，在一定波長下，用來檢測血清中透明質酸的含量。實驗結果表明，本發明所述的膠乳免疫比濁法制備的透明質酸檢測試劑盒相對其他方法學的透明質酸檢測試劑盒在準確度、精密度、線性、穩定性、靈敏度方面均較好，且該方法較其他方法安全性好，檢測速速快，且易自動化，試用在產業上有效地推廣應用。

技術領域

本發明涉及體外診斷試劑生化試劑技術領域，具體涉及一種透明質酸檢測試劑盒及其方法。

背景技術

透明質酸(hyaluronic acid HA)是一種大分子的多糖，其主要合成場所是間質細胞，并通過淋巴循環進入人體血液中，后在肝臟中代謝，通過腎小球濾過后排出。一般正常人血清含HA的量小于100ng/ml。由于透明質酸是經過肝內皮細胞攝取降解，所以患有肝病的患者尤其是肝硬化的患者，由于肝內皮細胞受損，導致其對透明質酸的攝取和降解功能的下降，使得肝病患者血清中的透明質酸含量增加，所有通過檢測血清中透明質酸的含量的變化可以做為早期診斷肝纖維化的指標。另外，患有類風濕性關節炎和硬皮病時，會增加血清中透明質酸的來源，而使其含量增加；或者肝腎疾病會影響人體內透明質酸的排出，而使其在血清中的含量增加。所以，通過檢測血清中透明質酸含量的變化，可以反映肝臟病變及肝硬化程度。

目前血清中透明質酸的含量的檢測方法主要有放射性免疫檢測法、酶聯免疫檢測法 (ELISA)、化學發光免疫分析法(CLIA)。放射性免疫檢測法主要是在未知HA量的標本中加入一定量透明質酸結合蛋白(HABP)；再加入碘標記透明質酸，使其與標本反應所剩的HABP 結合；再用第一抗體即羊或者兔抗HABP血清、第二抗體即驢抗羊或羊抗兔血清，將HABP沉淀下去，測定其放射性，HABP所結合的碘標記的HA與標本中HA含量呈負相關，用HA標準品同步對比操作作出放射性濃度標準曲線，把測得的待測標本放射性相對值在標準曲線上查出對應濃度值。但該方法對設備和人員要求高，不利于應用推廣。ELISA檢測HA主要是以HABP (透明質酸結合蛋白)為抗體、雙夾心法為基礎，與放免法比較，靈敏度相近，但檢測血清 HA值卻明顯低于放免法?；瘜W發光免疫分析法檢測血清中的透明質酸，主要基于競爭和夾心兩種技術，競爭法的原理是將樣本中的HA通過與固相載體上的包被HA與稀釋液中的HABP結合實現檢測，樣本HA濃度越高，發光值越低；夾心法檢測通過形成固相包被HABP-HA-HABP”夾心復合物”實現檢測，發光值與樣本HA濃度成正比。但該方法與酶免和放免檢測的正常人血清中HA的含量差異很大，分析可能原因是HA本身是一類分子量大小不均勻的多糖分子，其分子量的范圍從105-107，雙抗體夾心法需要有20個以上的糖基與蛋白結合才能夠檢測出來，而放免和酶免不需要HA有20個以上的糖基，所以其檢測的范圍較雙抗體夾心法廣泛。而酶免和放免檢測透明質酸均有其不足之處。

發明內容

鑒于此，本發明的目的在于提供一種檢測血清樣本中透明質酸含量的操作簡便、成本低、可自動化、準確度高的方法，使其能夠在臨床上得到廣泛應用。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案如下：

一種透明質酸檢測試劑盒，該試劑盒包含試劑R1、R2和校準品；其中試劑R1中包含緩沖液、氯化鈉、防腐劑以及穩定劑。所述試劑R2包含活化緩沖液、包被緩沖液、封閉液、貯存緩沖液，以及膠乳微球和HABP，以及偶聯劑。

本發明的檢測原理如下：將透明質酸結合蛋白(HABP)通過偶聯劑包被至膠乳微球上，樣本中的HA與微球上的HABP特異性結合后，通過在一定波長下測定吸光度的變化，此種變化與樣本中的HA含量成比例，從而定量測定出血清樣本中HA的含量。