[發(fā)明專利]一種同時(shí)測(cè)定毛發(fā)中鉤吻素子、鉤吻素甲和鉤吻素己的分析方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110595261.2
• 申請(qǐng)日: 2021-05-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113325103A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-08-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王鑫;向平;劉偉;楊歡;范先煜
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 司法鑒定科學(xué)研究院
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72
• 代理公司: 上海申新律師事務(wù)所 31272
• 代理人: 郎祺

本發(fā)明提供了一種同時(shí)測(cè)定毛發(fā)中鉤吻素子、鉤吻素甲和鉤吻素己的分析方法，包括如下步驟：步驟一，依次配制標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液、標(biāo)準(zhǔn)品工作溶液和內(nèi)標(biāo)溶液；步驟二，樣品處理；步驟三，LC?MS/MS分析。本發(fā)明首次進(jìn)行了毛發(fā)中鉤吻素子、鉤吻素甲、鉤吻素己的分析方法的開(kāi)發(fā)驗(yàn)證。本發(fā)明的方法簡(jiǎn)便快速，一步提取，毛發(fā)用量少，僅需10mg，采用提取溶液在低溫下濕磨提取毛發(fā)中的目標(biāo)物，研磨時(shí)間為10min，色譜運(yùn)行時(shí)間短(8min)，靈敏度滿足日常檢案要求。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及鉤吻生物堿檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種同時(shí)測(cè)定毛發(fā)中鉤吻素子、鉤吻素甲和鉤吻素己的分析方法。

背景技術(shù)

鉤吻(Gelsemium elegans)，民間俗稱很多，常見(jiàn)的有胡蔓草、斷腸草、爛腸草、大炮茶等，為馬前科胡蔓藤屬野生常綠纏繞藤本植物胡蔓藤(Gelsemium elegang Benth)的全草，主要分布在東南亞和我國(guó)南部的貴州、廣東、福建、云南和廣西等省。全草有劇毒，其毒性主要來(lái)源于吲哚類或氧化吲哚類生物堿。其中有毒成分主要有鉤吻素子(Koumine)、鉤吻素甲(Gelsemine)、鉤吻素己(Gelsenicine)等，鉤吻素子是最豐富的鉤吻生物堿，其次為鉤吻素甲，而鉤吻素己是毒性最高的鉤吻生物堿。鉤吻和其他良性草藥之間常常會(huì)因其形態(tài)相似而混淆，從而導(dǎo)致誤食和中毒，因此，血液、尿液和毛發(fā)等生物檢材中鉤吻素己、鉤吻素子和鉤吻素甲的檢測(cè)是判斷鉤吻中毒或相關(guān)案事件認(rèn)定的關(guān)鍵。

鉤吻素子、鉤吻素甲和鉤吻素己的濃度在血液樣品中鮮有報(bào)道，而在其他生物檢材如尿液或毛發(fā)中則幾乎沒(méi)有報(bào)道。在一些中毒案件中，許多中毒者經(jīng)過(guò)多天搶救后死亡，未能及時(shí)留取血液、尿液等，此時(shí)毛發(fā)分析可提供有價(jià)值的證據(jù)。毛發(fā)分析已廣泛用于法醫(yī)和臨床毒理學(xué)。與傳統(tǒng)的生物檢材(例如血液和尿液)相比，毛發(fā)具有檢出時(shí)限長(zhǎng)、能反映較長(zhǎng)時(shí)間(幾個(gè)月)的藥物使用情況等優(yōu)點(diǎn)，且樣品易獲取、易保存，據(jù)我們所知，尚未有關(guān)于分析測(cè)定毛發(fā)中鉤吻生物堿的研究報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種同時(shí)測(cè)定毛發(fā)中鉤吻素子、鉤吻素甲和鉤吻素己的分析方法。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：

提供一種同時(shí)測(cè)定毛發(fā)中鉤吻素子、鉤吻素甲和鉤吻素己的分析方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟一，依次配制標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液、標(biāo)準(zhǔn)品工作溶液和內(nèi)標(biāo)溶液；

步驟二，將空白毛發(fā)樣品和待測(cè)毛發(fā)樣品分別依次用超純水、丙酮清洗，收集最后一次丙酮清洗液吹干，吹干后再分別用甲醇復(fù)溶用以排除外污染因素，毛發(fā)樣品室溫下干燥；將干燥后的所述待測(cè)毛發(fā)樣品剪成小段，精密稱后置于研磨管中，加入研磨珠、所述內(nèi)標(biāo)溶液和甲醇，使用冷凍研磨儀磨碎；然后離心，得到的上清液經(jīng)0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，得到待測(cè)樣品溶液；

將干燥后的所述空白毛發(fā)樣品剪成小段，精密稱后分別置于若干研磨管中，分別加入所述標(biāo)準(zhǔn)品工作溶液適量得到不同質(zhì)量濃度的系列空白毛發(fā)樣品，加入研磨珠，使用冷凍研磨儀磨碎；然后離心，得到的上清液經(jīng)0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，得到系列空白毛發(fā)樣品溶液；

步驟三，將所述待測(cè)樣品溶液和系列空白毛發(fā)樣品溶液分別進(jìn)樣，LC-MS/MS分析，

其中，色譜條件為：RestekAllure PFP丙基柱，100mm×2.1mm，5μm；流動(dòng)相A為含0.1％甲酸的20mmol/L乙酸銨緩沖溶液，流動(dòng)相B為甲醇；流速為0.3～0.5mL/min，流動(dòng)相A：B＝30～40：60～70等度恒流洗脫8～12min，柱溫為室溫；自動(dòng)進(jìn)樣器保持在4℃；

質(zhì)譜條件為：電噴霧離子器質(zhì)譜的正離子模式檢測(cè)，多離子模式監(jiān)測(cè)，采用Analyst software 1.5(Waters)和MultiQuant 3.0.2工作站進(jìn)行數(shù)據(jù)收集和分析；質(zhì)譜儀離子噴霧電壓為5500V，離子源溫度550℃，氣簾氣為30psi，霧化氣(GS1)、輔助氣(GS2)為50psi。