[發明專利]一種同時測定毛發中鉤吻素子、鉤吻素甲和鉤吻素己的分析方法

在審

• 申請號: 202110595261.2
• 申請日: 2021-05-28
• 公開（公告）號: CN113325103A
• 公開（公告）日: 2021-08-31
• 發明（設計）人: 王鑫;向平;劉偉;楊歡;范先煜
• 申請（專利權）人: 司法鑒定科學研究院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72
• 代理公司: 上海申新律師事務所 31272
• 代理人: 郎祺

本發明提供了一種同時測定毛發中鉤吻素子、鉤吻素甲和鉤吻素己的分析方法，包括如下步驟：步驟一，依次配制標準品儲備液、標準品工作溶液和內標溶液；步驟二，樣品處理；步驟三，LC?MS/MS分析。本發明首次進行了毛發中鉤吻素子、鉤吻素甲、鉤吻素己的分析方法的開發驗證。本發明的方法簡便快速，一步提取，毛發用量少，僅需10mg，采用提取溶液在低溫下濕磨提取毛發中的目標物，研磨時間為10min，色譜運行時間短(8min)，靈敏度滿足日常檢案要求。

技術領域

本發明涉及鉤吻生物堿檢測技術領域，尤其涉及一種同時測定毛發中鉤吻素子、鉤吻素甲和鉤吻素己的分析方法。

背景技術

鉤吻(Gelsemium elegans)，民間俗稱很多，常見的有胡蔓草、斷腸草、爛腸草、大炮茶等，為馬前科胡蔓藤屬野生常綠纏繞藤本植物胡蔓藤(Gelsemium elegang Benth)的全草，主要分布在東南亞和我國南部的貴州、廣東、福建、云南和廣西等省。全草有劇毒，其毒性主要來源于吲哚類或氧化吲哚類生物堿。其中有毒成分主要有鉤吻素子(Koumine)、鉤吻素甲(Gelsemine)、鉤吻素己(Gelsenicine)等，鉤吻素子是最豐富的鉤吻生物堿，其次為鉤吻素甲，而鉤吻素己是毒性最高的鉤吻生物堿。鉤吻和其他良性草藥之間常常會因其形態相似而混淆，從而導致誤食和中毒，因此，血液、尿液和毛發等生物檢材中鉤吻素己、鉤吻素子和鉤吻素甲的檢測是判斷鉤吻中毒或相關案事件認定的關鍵。

鉤吻素子、鉤吻素甲和鉤吻素己的濃度在血液樣品中鮮有報道，而在其他生物檢材如尿液或毛發中則幾乎沒有報道。在一些中毒案件中，許多中毒者經過多天搶救后死亡，未能及時留取血液、尿液等，此時毛發分析可提供有價值的證據。毛發分析已廣泛用于法醫和臨床毒理學。與傳統的生物檢材(例如血液和尿液)相比，毛發具有檢出時限長、能反映較長時間(幾個月)的藥物使用情況等優點，且樣品易獲取、易保存，據我們所知，尚未有關于分析測定毛發中鉤吻生物堿的研究報道。

發明內容

本發明的目的是針對現有技術中的不足，提供一種同時測定毛發中鉤吻素子、鉤吻素甲和鉤吻素己的分析方法。

為實現上述目的，本發明采取的技術方案是：

提供一種同時測定毛發中鉤吻素子、鉤吻素甲和鉤吻素己的分析方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟一，依次配制標準品儲備液、標準品工作溶液和內標溶液；

步驟二，將空白毛發樣品和待測毛發樣品分別依次用超純水、丙酮清洗，收集最后一次丙酮清洗液吹干，吹干后再分別用甲醇復溶用以排除外污染因素，毛發樣品室溫下干燥；將干燥后的所述待測毛發樣品剪成小段，精密稱后置于研磨管中，加入研磨珠、所述內標溶液和甲醇，使用冷凍研磨儀磨碎；然后離心，得到的上清液經0.22μm微孔濾膜過濾，得到待測樣品溶液；

將干燥后的所述空白毛發樣品剪成小段，精密稱后分別置于若干研磨管中，分別加入所述標準品工作溶液適量得到不同質量濃度的系列空白毛發樣品，加入研磨珠，使用冷凍研磨儀磨碎；然后離心，得到的上清液經0.22μm微孔濾膜過濾，得到系列空白毛發樣品溶液；

步驟三，將所述待測樣品溶液和系列空白毛發樣品溶液分別進樣，LC-MS/MS分析，

其中，色譜條件為：RestekAllure PFP丙基柱，100mm×2.1mm，5μm；流動相A為含0.1％甲酸的20mmol/L乙酸銨緩沖溶液，流動相B為甲醇；流速為0.3～0.5mL/min，流動相A：B＝30～40：60～70等度恒流洗脫8～12min，柱溫為室溫；自動進樣器保持在4℃；

質譜條件為：電噴霧離子器質譜的正離子模式檢測，多離子模式監測，采用Analyst software 1.5(Waters)和MultiQuant 3.0.2工作站進行數據收集和分析；質譜儀離子噴霧電壓為5500V，離子源溫度550℃，氣簾氣為30psi，霧化氣(GS1)、輔助氣(GS2)為50psi。