[發明專利]一種同時測定毛發中鉤吻素子、鉤吻素甲和鉤吻素己的分析方法

在審

• 申請號: 202110595261.2
• 申請日: 2021-05-28
• 公開（公告）號: CN113325103A
• 公開（公告）日: 2021-08-31
• 發明（設計）人: 王鑫;向平;劉偉;楊歡;范先煜
• 申請（專利權）人: 司法鑒定科學研究院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72
• 代理公司: 上海申新律師事務所 31272
• 代理人: 郎祺

1.一種同時測定毛發中鉤吻素子、鉤吻素甲和鉤吻素己的分析方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟一，依次配制標準品儲備液、標準品工作溶液和內標溶液；

步驟二，將空白毛發樣品和待測毛發樣品分別依次用超純水清洗、丙酮清洗，收集最后一次丙酮清洗液，吹干后用甲醇復溶用以排除外污染因素；毛發在室溫下干燥；將干燥后的所述待測毛發樣品剪成小段，精密稱后置于研磨管中，加入研磨珠、所述內標溶液和甲醇，使用冷凍研磨儀磨碎；然后離心，得到的上清液經微孔濾膜過濾，得到待測樣品溶液；

將干燥后的所述空白毛發樣品剪成小段，精密稱后分別置于若干研磨管中，分別加入所述標準品工作溶液適量得到不同質量濃度的系列空白毛發樣品，加入研磨珠，使用冷凍研磨儀磨碎；然后離心，得到的上清液經微孔濾膜過濾，得到系列空白毛發樣品溶液；

步驟三，將所述待測樣品溶液和系列空白毛發樣品溶液分別進樣，LC-MS/MS分析，

其中，色譜條件為：Restek Allure PFP丙基柱，100mm×2.1mm，5μm；流動相A為含0.1％甲酸的20mmol/L乙酸銨緩沖溶液，流動相B為甲醇；流速為0.3～0.5mL/min，流動相A：B＝30～40：60～70等度恒流洗脫8～12min，柱溫為室溫；自動進樣器保持在4℃；

質譜條件為：電噴霧離子器質譜的正離子模式檢測，多離子模式監測，采用Analystsoftware 1.5(Waters)和MultiQuant 3.0.2工作站進行數據收集和分析；質譜儀離子噴霧電壓為5500V，離子源溫度550℃，氣簾氣為30psi，霧化氣(GS1)、輔助氣(GS2)為50psi。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述標準品儲備液的配制過程為：分別精密稱取鉤吻素甲、鉤吻素子及鉤吻素己標準物質，分別采用甲醇溶解配制成質量濃度為1.0mg/mL標準品儲備液，密封后儲存于-20℃的冰箱中備用；所述標準品工作溶液的配制過程為：取所述標準品儲備液適量，用甲醇逐步稀釋得到濃度為10000、5000、1000、100和10ng/mL的標準品工作溶液。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述內標溶液的配制過程為：精密吸取氯胺酮-d4標準溶液10μL，加入990μL甲醇稀釋制成內標物質儲備液；取所述內標物質儲備液適量，用甲醇稀釋得到濃度為10ng/mL的內標溶液。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，將干燥后的所述毛發樣品剪成2-3mm小段，精密稱取剪段后的所述毛發樣品10mg置于2mL的研磨管中，加入適量研磨珠、50μL所述內標溶液和450μL甲醇，使用冷凍研磨儀磨碎。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述冷凍研磨儀的參數設置如下：速度，2500rpm；運行次數，15次；間隔時間為60s，并以18m/s的速度研磨。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述離心的條件為：以9700×g離心3min。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述色譜條件為：Restek Allure PFP丙基柱，100mm×2.1mm，5μm；流動相A為含0.1％甲酸的20mmol/L乙酸銨緩沖溶液，流動相B為甲醇；流速為0.3mL/min，流動相A：B＝30：70等度恒流洗脫8min，柱溫為室溫；自動進樣器保持在4℃。