[發明專利]一種鈀銀銅介孔納米球信號放大的電化學免疫傳感器的制備方法及應用

有效

• 申請號: 202110591228.2
• 申請日: 2021-05-28
• 公開（公告）號: CN113295867B
• 公開（公告）日: 2023-09-12
• 發明（設計）人: 李月云;商晴;唐峰
• 申請（專利權）人: 山東理工大學
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N27/48;G01N27/327
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種鈀銀銅介孔納米球信號放大的電化學免疫傳感器的制備方法，其特征在于，步驟如下：

(1)將直徑為3.0～5.0mm的玻碳電極用Al₂O₃拋光粉打磨，超純水清洗干凈；

(2)將6.0μL、1.0～2.0mg/mL的金納米粒子/碳化ZIF-L分散液滴加到電極表面，室溫下晾干，超純水沖洗電極表面，晾干；

(3)將6.0μL、5.0～15.0μg/mL的腫瘤標志物捕獲抗體Ab₁滴加到電極表面，超純水沖洗，4℃冰箱中晾干；

(4)繼續將4μL、0.8～1.2mg/mL的牛血清白蛋白BSA溶液滴加到電極表面，超純水沖洗電極表面，4℃冰箱中晾干；

(5)繼續滴加6.0μL、10.0fg/mL～100.0ng/mL的一系列不同濃度的腫瘤標志物抗原溶液，超純水沖洗電極表面，4℃冰箱中晾干；

(6)繼續滴加6.0μL、1.0～3.0mg/mL的鈀銀銅介孔納米球/檢測抗體Ab₂分散液，超純水沖洗電極表面，4℃冰箱中晾干，制得一種鈀銀銅介孔納米球信號放大的電化學免疫傳感器；

所述金納米粒子/碳化ZIF-L分散液的制備，包括以下步驟：

(1)金納米粒子分散液的制備

取0.1～0.3mL、1.0wt％的四水合氯金酸加入到50.0mL的圓底瓶中，加入19.7～19.9mL的超純水稀釋，在磁力攪拌下加熱至微沸；將0.2～0.4mL、10.0mg/mL的檸檬酸鈉加入至上述溶液攪拌回流15min，冷卻后，制得金納米粒子分散液；

其中10.0mg/mL的檸檬酸鈉采用如下步驟配制：稱取10.0mg檸檬酸鈉加入到1.0mL超純水中，制得10.0mg/mL的檸檬酸鈉溶液備用；

(2)碳化ZIF-L的制備

稱取200.0～400.0mg六水合硝酸鋅加至小燒杯中，加入20.0mL超純水，攪拌至完全溶解得溶液A，另取一燒杯加入20.0mL超純水和600.0～700.0mg甲基咪唑充分溶解后加入到溶液A中，磁力攪拌4h，反應完全后，超純水離心洗滌三次，然后-60℃真空冷凍干燥12h，得到白色粉末，將白色粉末放入在石英舟內，并將石英舟置于管式爐中，先通氮氣30min，隨后以5℃/min加熱至900℃并恒溫3h，冷卻到室溫后，制得碳化ZIF-L；

(3)金納米粒子/碳化ZIF-L分散液的制備

稱取1.0～3.0mg上述制備的碳化ZIF-L加入到1.0mL超純水中，超聲分散，將1.0～3.0mL金納米粒子分散液滴加到上述分散介質中，震蕩12h，超純水離心洗滌三次，得下層沉淀，加入1.0mL超純水，分散均勻，制得金納米粒子/碳化ZIF-L分散液；

所述鈀銀銅介孔納米球/檢測抗體Ab₂分散液的制備，步驟如下：

(1)鈀銀銅介孔納米球的制備

稱取3.0～9.0mg雙十八烷基二甲基氯化銨溶解在10.0mL的乙醇/水體積比為2:8共溶劑中，然后加入0.1～0.3mL、100.0mmol/L的氫氧化鈉溶液調節pH，隨即加入0.48mL、10.0mmol/L的四氯鈀酸鈉溶液至上述溶液中，攪拌10min后，依次加入0.24mL、10.0mmol/L硝酸銀溶液和0.08mL、10.0mmol/L硝酸銅溶液，并保持靜置30min；在攪拌狀態下將1.0mL、新制備的0.3mol/L抗壞血酸溶液迅速加入上述溶液中，反應30min后，依次用乙酸，乙醇和超純水分別洗滌，制得鈀銀銅介孔納米球；

所用0.3mol/L抗壞血酸溶液的制備方法：稱取52.8mg抗壞血酸溶解在1.0mL超純水中；

(2)鈀銀銅介孔納米球/檢測抗體Ab₂分散液的制備

取2.0～6.0mg的鈀銀銅介孔納米球，加入1.0～2.0mL、20.0～30.0μg/mL的腫瘤標志物檢測抗體Ab₂分散液，置于4℃恒溫振蕩培養箱中振蕩孵化6.0～8.0h后，在3000轉速下離心5.0～10.0min，得下層沉淀，加入1.0mL、pH＝7.38磷酸鹽緩沖溶液離心洗滌三次，取下層沉淀，加入1.0mL、pH＝7.38磷酸鹽緩沖溶液，分散均勻，制得鈀銀銅介孔納米球/檢測抗體Ab₂分散液。