[發明專利]一種基于雙磁性納米粒子檢測氨基甲酸酯類農藥的方法

有效

• 申請號: 202110590625.8
• 申請日: 2021-05-28
• 公開（公告）號: CN113219104B
• 公開（公告）日: 2022-04-22
• 發明（設計）人: 王淼;王靜;朱永安;金芬;佘永新;曹振;鄭鷺飛;邵華
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院農業質量標準與檢測技術研究所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/08;G01N30/74
• 代理公司: 北京德崇智捷知識產權代理有限公司 11467
• 代理人: 申星宇

1.一種基于雙磁性納米粒子檢測氨基甲酸酯類農藥的方法，其特征在于，包括以下步驟：

A采用乙腈提取農產品樣品中的農藥殘留得到提取液；

B加入C18修飾磁性納米粒子Fe₃O₄@SiO₂對提取液中農藥殘留進行吸附富集，棄去上清;

C加入甲醇,洗脫C18修飾磁性納米粒子Fe₃O₄@SiO₂上富集的農藥殘留，磁分離得到洗脫液；

D將洗脫液加入4倍體積的pH7.5,0.01Mol/L的PBS水溶液按照1：4混合后，加入磁性介孔 Fe3O4@SiO2@mSiO2納米粒子包覆的乙酰膽堿酯酶，反應20-40min；

E反應結束后磁分離棄去上清液，加入顯色液進行顯色反應；

F分離顯色液上清進行分光光度法檢測;

Fe3O4納米粒子的制備方法:

稱取FeCl2·4H2O和FeCl3·6H2O,按1：1mol比配制混合溶液,在氮氣保護下65℃水浴加熱,快速攪拌,滴加堿性溶液至中性,生成Fe₃O₄,加入無水乙醇,靜置10min后,將溫度升高到80℃進行熟化，反應30min后,進行強磁沉降后分離上層清液,用蒸餾水和無水乙醇洗滌Fe₃O₄沉淀物至中性，將Fe₃O₄沉淀物在75℃下干燥5h,得磁性納米Fe3O4粒子;

Fe₃O₄@SiO₂納米粒子的制備方法:

按照每1g磁性納米Fe₃O₄粒子加入200mL乙醇，超聲30min，乙醇溶液按照體積比200：25：4：3 ，依次加入 ddH₂O，30%濃度氨水和正硅酸乙酯，在30℃攪拌后反應8-12h，磁鐵吸附沉淀后，將乙醇洗滌沉淀收集得到Fe₃O₄@SiO₂ 納米粒子;

C18修飾磁性納米粒子Fe₃O₄@SiO₂的制備方法：

將Fe₃O₄@SiO₂納米粒子按照每1g加入2mL二甲基十八烷基氯硅烷和500mL異丙醇超聲10min，于70℃攪拌6h得到C18修飾磁性納米粒子Fe₃O₄@SiO₂；

磁性介孔 Fe3O4@SiO2@mSiO2納米粒子包覆的乙酰膽堿酯酶的制備方法：

介孔二氧化硅包覆的Fe₃O₄@SiO₂的制備：

取Fe₃O₄@SiO₂ 按照質量比2：3加入十六烷基三甲基溴化銨進行混合，按照每1g混合物加入60mL乙醇，140mLddH₂O，2mL30%濃度氨水攪拌10min，滴加4.4mLTEOS，45℃攪拌10h，之后將Fe₃O₄@SiO₂@mSiO₂于丙酮溶液中加熱回流24h以上，除去模板CTAB得到Fe₃O₄@SiO₂@mSiO₂納米粒子；

納米粒子氨基化：

按照每1g Fe₃O₄@SiO₂@mSiO₂納米粒子加入2mL3-氨丙基三乙氧基硅烷，500mL異丙醇超聲10min，于70℃攪拌6h得到氨基化的Fe₃O₄@SiO₂@mSiO₂納米粒子；

乙酰膽堿酯酶的固定化：

按照每1g氨基化的Fe₃O₄@SiO₂@mSiO₂加入4%的戊二醛200mL活化2h，用磁吸附，乙醇洗滌數次后加入ddH2O洗滌，最后將Fe₃O₄@SiO₂@mSiO₂加入至50mL 0.1mg/mLAChE中，16℃搖床振蕩過夜，磁吸附去除上清，ddH2O洗滌后加入50mL PBS，在4℃中保存。

2.根據權利要求1所述一種基于雙磁性納米粒子檢測氨基甲酸酯類農藥的方法，其特征在于，所述乙腈提取農產品樣品中的農藥殘留的方法包括：按照每10g 待檢測樣品中加入20mL 乙腈溶液，在所述溶液中按照質量比4:1:2依次加入氯化鈉和無水硫酸鎂，振蕩搖勻靜置分層后取上清液得到提取液。