[發明專利]一種提高大豆胞囊線蟲侵染效率的抗性鑒定方法

有效

• 申請號: 202110588951.5
• 申請日: 2021-05-28
• 公開（公告）號: CN113179898B
• 公開（公告）日: 2022-12-27
• 發明（設計）人: 練云;盧為國;李海朝;王仕偉;雷晨芳;李金英;武永康;王金社
• 申請（專利權）人: 河南省農業科學院
• 主分類號: A01G22/40
• 分類號: A01G22/40;A01G7/06;A01G7/00
• 代理公司: 鄭州市華翔專利代理事務所(普通合伙) 41122
• 代理人: 張愛軍

本發明涉及一種提高大豆胞囊線蟲侵染效率的抗性鑒定方法，通過對培養條件、計數方法、接種方法等步驟的改進，有效改善了用于抗性鑒定的大豆植株的生長環境，使接種的蟲卵數量更佳精確，提高了蟲卵侵染效率，使得大豆胞囊線蟲抗性鑒定結果不同重復間數據差異不顯著、數據更準確、可靠，降低了由于需要多次重復帶來的工作量，對大豆胞囊線蟲抗性鑒定工作的開展有極大的應用價值。

技術領域

本發明涉及一種提高大豆胞囊線蟲侵染效率的抗性鑒定方法，屬于農作物抗病性鑒定領域。

背景技術

大豆是我國主要經濟作物之一，隨著社會經濟發展和人們生活水平的提高，我國大豆需求量急劇增加，伴隨著近幾年國內外大豆產區大豆胞囊線蟲優勢生理小種致病性升級、具有超強致病力的大豆胞囊線蟲新小種X12的發現以及國內癥青、根腐病等病害發生，已連續多年給大豆造成嚴重減產，這對培育抗病、優質、高產大豆品種提出迫切需求。大豆胞囊線蟲病是一種世界性大豆病害，世界各國大豆產區均有發生。生產實踐證明種植大豆胞囊線蟲-抗病品種是抵御該病害最經濟、有效的措施，而篩選抗性種質資源是培育大豆胞囊線蟲-抗性品種的先決條件，人們以胞囊指數(Female Index，FI)為指標，對種質資源進行抗性水平劃分。

篩選大豆胞囊線蟲抗性種質資源主要依靠溫室內表型鑒定。表型鑒定工作費時、費力且誤差較大，其主要原因如下：一、由于著生在根系上的大豆胞囊體形小、數量多，雖然計數方法已經有很大改進，但仍然很難獲得準確數值；二、雖然抗性鑒定多在室內進行，但寄生在根系中的線蟲容易受到溫度、濕度、接種操作不規范、接種濃度不一致以及接種時蟲卵活性的干擾等多方面因素影響，常常出現即便是同一批次實驗，在同一個品種的多個重復間，待鑒定植株根系上的胞囊數目差異仍較大，導致抗性鑒定需要在不同時間多次重復。因此，在溫室內開展的看上去很簡單的表型抗性鑒定，由于諸多因素的影響，操作起來其實勞動強度很大、成本較高，抗性資源篩選效率一直較低。雖然在溫室內多會采取一系列措施進行控溫、控濕，但由于大豆胞囊線蟲對環境溫度和濕度敏感，已有的措施對大豆胞囊線蟲抗性鑒定工作，仍有很大不足。尤其需要對大豆胞囊線蟲侵染初期的幼苗進行精準溫室控制，同時，需要采取有效措施提升大豆胞囊線蟲侵染效率，保證侵染的一致性，提升抗性鑒定的準確性。

目前越來越多的報道表明，大豆胞囊線蟲優勢生理小種出現了致病能力升級現象，比如在2016年報道的中國大豆主產區-黃淮地區和美國密蘇里大豆產區，優勢生理小種均由1號生理小種升級到2號生理小種；在中國，前期還發現了具有超強致病力新小種X12，且大豆胞囊線蟲仍在擴散。在這樣的情況下，急需一種穩定鑒定大豆胞囊線蟲抗性資源的篩選方法，并將篩選的抗源有效用于生產實踐。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明的目的是提供一種提高大豆胞囊線蟲侵染效率的抗性鑒定方法。

為了實現上述目的，本發明所采用的技術方案是：

一種提高大豆胞囊線蟲侵染效率的抗性鑒定方法，包括以下步驟：

(1)選擇受大豆胞囊線蟲感染的病土和無菌細沙分別以3∶0.5～1.0的體積比均勻混合，制備成試驗病土；將萌發3～5d，子葉出土期的感病對照大豆Lee植株移栽至裝有試驗病土的實驗杯中，每個實驗杯移栽1株，并放入底部墊有4cm高底濾網的塑料筐中培養；

(2)待大豆Lee植株培養25d后，將大豆Lee植株從試驗病土中倒出，采用淘洗-過篩法從根系中分離大豆胞囊，依次用“25目-60目-100目”篩網，將從根系上沖洗的大豆胞囊搜集至100目篩網上；經過破碎胞囊、蔗糖梯度離心法進行純化處理后，在顯微鏡下對大豆胞囊線蟲蟲卵進行計數，用于后續接種；

(3)將萌發3～5d的待鑒定材料移栽至無菌土中，每個材料重復4次，3-5d后長出新根，用3×75mm螺絲刀，在緊挨著待鑒定材料根系旁邊扎孔，隨后借助1mL槍頭輔助將步驟(2)所得接種液通過孔洞注入根系附近，接種時分兩次進行，每次注入一個孔，一次接種1500個蟲卵/株，兩次接種間隔24h；