[發明專利]針對C型逆轉錄病毒的數字PCR檢測用引物及檢測方法

在審

• 申請號: 202110588688.X
• 申請日: 2021-05-28
• 公開（公告）號: CN113186353A
• 公開（公告）日: 2021-07-30
• 發明（設計）人: 令吉明;楊洋;朱玉懿;張婧;劉昆
• 申請（專利權）人: 杭州晶佰生物技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 鄭州睿途知識產權代理事務所(普通合伙) 41183
• 代理人: 李伊寧

1.針對C型逆轉錄病毒的數字PCR檢測用引物組，其特征在于，該引物組針對C型逆轉錄病毒設計，適用于數字PCR檢測應用，具體引物設計為：

C-type-F：5’-ccggacccctgagtcacc -3’，

C-type-R：5’-taccagtcgcgagctggag -3’；

C-type-探針：FAM-TGGGTACAGGGAGCTACAGGCGGAA-BHQ1；

利用上述引物組進行PCR擴增時，擴增片段長度為99bp，擴增序列如SEQ ID No.1所示，具體如下：

ccggacccctgagtcaccggactgcatgggtacagggagctacaggcggaaagcagtaccattggactacaaatcggcagctccagctcgcgactggta。

2.基于所述針對C型逆轉錄病毒的數字PCR檢測用引物組的數字PCR擴增檢測用試劑盒。

3.所述針對C型逆轉錄病毒的數字PCR檢測用引物組在C型逆轉錄病毒檢測中應用，其特征在于，用于檢測CHO細胞中C型逆轉錄病毒。

4.基于所述針對C型逆轉錄病毒的數字PCR檢測用引物組的C型逆轉錄病毒的數字PCR檢測方法，其特征在于，以C型逆轉錄病毒的RNA作為為模板，進行數字PCR擴增。

5.如權利要求4所述數字PCR檢測方法，其特征在于，數字PCR擴增時，15μl反應體系設計如下：

RNA模板，3μl；

C-type-F，10μM、0.6μl；

C-type-R，10μM、1.2μl；

C-type-探針，10μM、0.36μl；

2x 的RT-PCR Buffer，7.5μl；

25x 的RT-PCR Enzyme Mix，0.6μl；

NF water，1.74μl。

6.如權利要求5所述數字PCR檢測方法，其特征在于，數字PCR擴增時，具體PCR反應程序為：45℃、10min；95℃、10min；95℃、50s；57℃、30s，72℃、1min30s，40個循環；72℃、5min；4℃保存。