[發明專利]一種檢測雙酚A的方法

在審

• 申請號: 202110585540.0
• 申請日: 2021-05-27
• 公開（公告）號: CN113311157A
• 公開（公告）日: 2021-08-27
• 發明（設計）人: 梁培;張秀斌;徐宛冰
• 申請（專利權）人: 中國計量大學
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/543;G01N21/65
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明提供一種檢測雙酚A的方法，包括以下步驟：S1、制備SERS免疫探針溶液，所述SERS免疫探針溶液包含修飾有拉曼信標分子的Au@Ag納米顆粒?抗體復合物；S2、制備SERS免疫層析試紙，將吸水紙、硝酸纖維素膜、樣品墊以及PVC板組裝在一起，將羊抗鼠IgG抗體固定到所述硝酸纖維素膜作為控制線，將雙酚A包被原固定到所述硝酸纖維素膜作為檢測線，將所述硝酸纖維素膜放在恒溫培養箱培養；S3、檢測雙酚A，將待測溶液與SERS免疫探針溶液在微孔板中預混合，再將SERS免疫層析試紙插入所述微孔板中，等待至少十分鐘后取出SERS免疫層析試紙，待該SERS免疫層析試紙干燥后使用拉曼光譜儀對其進行拉曼檢測。

技術領域

本發明涉及一種免疫學結合光譜檢測領域，尤其涉及一種檢測雙酚A的方法。

背景技術

雙酚A(BPA)作為典型的環境激素類物質，長時間低劑量攝入，會對人體的內分泌系統、神經系統、免疫系統和生殖系統等構成危害，甚至存在誘發癌癥的風險，存在于大氣、水環境、污泥及沉積物、食品及包裝等多種環境介質中。現有檢測方法很多，如酶聯免疫吸附法 (ELISA)、熒光分光光度法、電化學分析法、毛細管電泳(CE)、固相微萃取(SPME)、氣相色譜質譜法(GC/MS)、高效液相色譜法 (HPLC)等方法推動了雙酚A檢測的研究進程，但也存在著一些局限：例如樣品制備時間長，測量時間長，有害有機副產物量大，昂貴的儀器和間接測量以及需要專業的人員操作等。

表面增強拉曼光譜技術(SERS，surface-enhanced Raman spectroscopy)作為一種新興的快速檢測技術，是指在金、銀、銅等貴金屬顆粒表面或者溶膠中，在激發區域內，吸附在SERS基底上的分子的拉曼散射信號比普通拉曼散射信號大大增強的現象。表面增強拉曼光譜具有化學指紋信息，因此具有靈敏度高、檢測速度快、對操作人員要求不高、不受水干擾等優點。免疫色譜法是借助于抗原與抗體之間能夠進行特異性結合而建立的一種具有高選擇性的分析方法。由于其簡便、快速和低成本的優勢，被認為是最成功的POCT。目前，ICA已經被廣泛用于病毒、疾病標記、藥物殘留、細菌和環境污染物的快速檢測。但是，傳統的金標試紙是基于小尺寸金納米顆粒積累的顏色反應的低信號強度限制了ICA的現場實時檢測；而且，大多數常規膠體金試紙條只能進行定性或者半定量檢測，在很多情況下無法滿足定量分析的要求。

因此，有必要提出一種技術方案來提高ICA的檢測靈敏度和實現定量分析。

發明內容

為解決上述技術問題，本發明提供一種檢測雙酚A的方法，所述方法包括以下步驟：

S1、制備SERS免疫探針溶液，所述SERS免疫探針溶液包含修飾有拉曼信標分子的Au@Ag納米顆粒-抗體復合物；

S2、制備SERS免疫層析試紙，將吸水紙、硝酸纖維素膜、樣品墊以及PVC板組裝在一起，將羊抗鼠IgG抗體固定到所述硝酸纖維素膜的控制線，將雙酚A包被原固定到所述硝酸纖維素膜的檢測線，將所述硝酸纖維素膜放在恒溫培養箱培養，得到SERS免疫層析試紙；

S3、檢測雙酚A，將待測溶液與所述SERS免疫探針溶液在微孔板中預混合，再將所述SERS免疫層析試紙插入所述微孔板中，等待至少十分鐘后取出所述SERS免疫層析試紙，待該SERS免疫層析試紙干燥后使用拉曼光譜儀對其進行拉曼檢測。

進一步的，所述步驟S1中包括：

S110、利用氯金酸還原制備出Au納米溶液；

S120、向所述Au納米溶液加入DTNB乙醇溶液并持續攪拌；

S130、離心棄上清，用超純水重懸至原始體積，制備得到AuDTNB NPs溶液；

S140、將Ag層修飾到所述AuDTNB NPs溶液表面得到 AuDTNB@Ag NPs溶液；

S150、將所述AuDTNB@Ag NPs溶液制備為SERS免疫探針溶液。