[發明專利]一種檢測雙酚A的方法

在審

• 申請號: 202110585540.0
• 申請日: 2021-05-27
• 公開（公告）號: CN113311157A
• 公開（公告）日: 2021-08-27
• 發明（設計）人: 梁培;張秀斌;徐宛冰
• 申請（專利權）人: 中國計量大學
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/543;G01N21/65
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種檢測雙酚A的方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、制備SERS免疫探針溶液，所述SERS免疫探針溶液包含修飾有拉曼信標分子的Au@Ag納米顆粒-抗體復合物；

S2、制備SERS免疫層析試紙，將吸水紙、硝酸纖維素膜、樣品墊以及PVC板組裝在一起，將羊抗鼠IgG抗體固定到所述硝酸纖維素膜的控制線，將雙酚A包被原固定到所述硝酸纖維素膜的檢測線，將所述硝酸纖維素膜放在恒溫培養箱培養，得到SERS免疫層析試紙；

S3、檢測雙酚A，將待測溶液與所述SERS免疫探針溶液在微孔板中預混合，再將所述SERS免疫層析試紙插入所述微孔板中，等待至少十分鐘后取出所述SERS免疫層析試紙，待該SERS免疫層析試紙干燥后使用拉曼光譜儀對其進行拉曼檢測。

2.根據權利要求1所述的檢測雙酚A的方法，其特征在于，所述步驟S1中包括：

S110、利用氯金酸還原制備出Au納米溶液；

S120、向所述Au納米溶液加入DTNB乙醇溶液并持續攪拌；

S130、將步驟S120中得到的溶液進行離心棄上清處理，并用超純水重懸至原始體積，制備得到Au^DTNBNPs溶液；

S140、將Ag層修飾到所述Au^DTNBNPs溶液表面得到Au^DTNB@Ag NPs溶液；

S150、將所述Au^DTNB@Ag NPs溶液制備為SERS免疫探針溶液。

3.根據權利要求2所述的檢測雙酚A的方法，其特征在于，所述步驟S140中包括：

S141、向所述Au^DTNBNPs溶液加入濃度為1％wt的聚乙烯吡咯烷酮至少攪拌5min；

S142、再加入濃度為10mM的抗壞血酸至少攪拌15min；最后加入濃度為10mM的硝酸銀溶液至少攪拌30min；

S143、當步驟S142中的溶液顏色由紫紅色變成灰黃色，離心棄上清，用超純水重懸至原始體積得到Au^DTNB@Ag NPs溶液。

4.根據權利要求2所述的檢測雙酚A的方法，其特征在于，所述步驟S150中包括：

S151、取1mL步驟S140制備得的Au^DTNB@Ag NPs溶液，加入2μL濃度為0.05M的K₂CO₃，迅速搖晃均勻；

S152、加入6μg濃度為0.2mg/mL的BPA抗體，轉動30min；

S153、加入100μL濃度為10％的牛血清白蛋白，轉動30min，置于保持所述BPA抗體活性的溫度環境中封閉8-10h。

5.根據權利要求4所述的檢測雙酚A的方法，其特征在于，所述步驟S153中包括：首先，將步驟S153中封閉8-10h后的溶液于保持所述BPA抗體活性的溫度環境中離心兩次，洗滌液為2mM的Broax溶液，再加入金標抗體保存液得到SERS免疫探針溶液。

6.根據權利要求5所述的檢測雙酚A的方法，其特征在于：配置所述金標抗體保存液的方法為，每10mL濃度為20mM的硼酸-硼酸鈉緩沖液加入200μL10％的BSA和25μLproclin。

7.根據權利要求1所述的檢測雙酚A的方法，其特征在于：步驟S2中，先使用稀釋液將濃度為9.5mg/mL的雙酚A包被原稀釋15倍，將濃度為5mg/mL的羊抗鼠IgG抗體稀釋10倍，完成稀釋后，將雙酚A包被原固定到所述硝酸纖維素膜的檢測線，將羊抗鼠IgG抗體固定到所述硝酸纖維素膜的控制線。

8.根據權利要求7所述的檢測雙酚A的方法，其特征在于：所述稀釋液為含有2％乙醇的PBS緩沖液。

9.根據權利要求1所述的檢測雙酚A的方法，其特征在于：所述步驟S3中，所述待測溶液與SERS免疫探針溶液的混合比例為20：1。

10.根據權利要求1所述的檢測雙酚A的方法，其特征在于：步驟S3 中進行拉曼檢測，拉曼光譜的激發波長為633nm，功率為5mW，采集時間至少10s，在所述檢測線上進行多個點的信號采集，選取DTNB拉曼報告分子中1334cm^-1為特征峰，檢測一系列濃度的BPA標準品溶液。