[發明專利]一種具有靶向性的CpG核酸藥物遞送系統及其制備方法

在審

• 申請號: 202110584701.4
• 申請日: 2021-05-27
• 公開（公告）號: CN113304277A
• 公開（公告）日: 2021-08-27
• 發明（設計）人: 陳敬華;張慧杰;王志清;胡成龍;賴莉;柳恒青
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: A61K47/61
• 分類號: A61K47/61;A61K47/69;A61K31/711;A61P37/02;C08B37/02
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 彭素琴

本發明公開了一種具有靶向性的CpG核酸藥物遞送系統及其制備方法，屬于生物醫藥領域。本發明CpG核酸藥物遞送系統包括載體及CpG核酸藥物，其中所述載體通過特定方式制得的水溶性氨化酵母β?1,3?D?葡聚糖，該類水溶性氨化酵母β?1,3?D?葡聚糖表面帶有較高的正電荷，可與CpG可通過靜電作用緊密結合；該載體低毒，生物相容性好，能夠通過與其特異性識別受體Dectin?1結合靶向巨噬細胞；流式細胞術及激光共聚焦掃描顯微鏡分析顯示有高的轉染效率。本發明得到的低毒且生物相容性良好的CpG核酸藥物遞送系統能夠實現CpG核酸藥物的靶向遞送，提高細胞攝取效率。

技術領域

本發明涉及一種具有靶向性的CpG核酸藥物遞送系統及其制備方法，屬于生物醫藥領域。

背景技術

CpG寡核苷酸(以下簡稱CpG ODN)是一種富含未甲基化胞嘧啶-鳥嘌呤二核苷酸的DNA。未甲基化的CpG基序廣泛存在于細菌或病毒的基因組DNA中，且出現頻率遠遠高于脊椎動物，而且脊椎動物中80％的胞嘧啶第5位碳原子是甲基化的，這種顯著差異使CpG ODN可以被哺乳動物免疫系統視作“危險信號”而發起免疫應答。CpG ODN能夠被免疫細胞的Toll樣受體9(以下稱TLR9)識別促使細胞分泌各種細胞因子，誘導先天的或者適應性的免疫應答，可作為有效的免疫治療工具，在抗感染免疫、癌癥治療、過敏性疾病以及免疫佐劑等領域具有重要的應用價值。

由于CpG ODN本質是脫氧核苷酸，具有磷酸二酯鍵骨架結構，在血液中極易被核酸酶降解，穩定性低；并且在生理環境下寡核苷酸分子所帶的負電荷導致細胞攝取的效率低。因此為了提高CpG ODN的穩定性和攝取率，構建藥物遞送載體將其負載，形成CpG ODN的藥物遞送系統。近年來，納米技術的發展為解決核酸藥物的遞送問題提供了新的工具，已有大量研究報道顯示，納米材料負載的CpG核酸藥物表現出高活性、低毒性、生物相容性好等特點不僅能夠提高CpG ODN在血清中的穩定性還能提高免疫細胞對CpG ODN藥物遞送系統的攝取率，有望作為新型免疫治療制劑應用于相關疾病的預防和治療中。

酵母β-葡聚糖(Yeastβ-glucan)是以β-1,3-D-葡聚糖為主鏈，以β-1,6-D-葡聚糖為支鏈的高分子多糖，主要存在于酵母細胞壁的內層。酵母β-葡聚糖能夠通過與其特異性受體Dectin-1結合，刺激免疫細胞，引起一系列免疫反應，刺激免疫系統分泌細胞因子(TNF-α、IL-6、IL-1)等，因此酵母β-葡聚糖酵母是一種具有生物活性的免疫增強劑，具有很強的免疫刺激活性及抗腫瘤活性。基于酵母β-葡聚糖與Dectin-1之間的識別作用，酵母β-葡聚糖可以作為靶向免疫細胞的特殊材料用于構建靶向載藥系統，尤其是CpG ODN等具有免疫刺激的核酸藥物。酵母β-葡聚糖是天然的多糖納米載體具有無毒、良好的生物相容性和免疫活性的優點。經過氨基化修飾后，得到氨基化酵母β-葡聚糖作為CpG ODN的靶向載藥系統，能顯著提高轉染效率。

發明內容

本發明通過新奇的合成方法得到較好取代度的氨基化修飾酵母β-葡聚糖，表面富有正電荷的葡聚糖衍生物，載體能夠與CpG ODN緊密結合形成50～300nm的復合物。被巨噬細胞膜表面的Dectin-1識別，在RAW264.7細胞中，復合物的細胞攝取率明顯提高且幾乎超過PEI，并且該材料制備工藝簡單、無毒，且具有良好的生物相容性。因此，氨基化葡聚糖衍生物有望成為一種具有靶向性的CpG ODN遞送載體，應用于相關疾病的預防和治療。

本發明的第一個目的是提供一種制備CpG ODN遞送系統的方法，所述方法包括如下過程：

(1)通過羥基活化劑活化β-葡聚糖納米粒子上的羥基，再與含雙伯胺的化合物進行反應，得到氨基化β-葡聚糖納米粒子(NH₂-Glucan)；所述羥基活化劑為NaH和N,N-羰基二咪唑(CDI)；

(2)利用所得氨基化β-葡聚糖納米粒子作為載體，配制成分散液，然后與含有CpGODN的溶液混勻，通過靜電作用將CpG ODN裝載在載體中，獲得CpG ODN遞送系統。