[發(fā)明專利]pAM基因及其植物表達(dá)載體和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110584439.3
• 申請(qǐng)日: 2021-05-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113249399B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-08-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 潘煒?biāo)?/a>;陳剛;謝東玲;吳川
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 長(zhǎng)沙諾合松生物科技合伙企業(yè)（有限合伙）
• 主分類號(hào): C12N15/62
• 分類號(hào): C12N15/62;C12N15/82;C12N15/66;A01H5/12;A01H6/82
• 代理公司: 湖南兆弘專利事務(wù)所(普通合伙) 43008
• 代理人: 鄒大堅(jiān);黃麗

1.一種pAM基因，其特征在于，所述pAM基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的pAM基因，其特征在于，所述pAM基因由開(kāi)放閱讀框與鷹嘴豆褪綠性矮縮病毒基因組中的LIR、C1:C2、SIR基因組成，排列方式為L(zhǎng)IR→C1:C2→SIR→開(kāi)放閱讀框→LIR，所述開(kāi)放閱讀框包含啟動(dòng)子NOS terminator、克隆位點(diǎn)和終止子CaMV 35Spromoter，所述鷹嘴豆褪綠性矮縮病毒的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.一種植物表達(dá)載體，其特征在于，所述植物表達(dá)載體由權(quán)利要求1或2所述的pAM基因與植物載體重組構(gòu)建而成。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的植物表達(dá)載體，其特征在于，所述植物載體為pEGAD，所述植物載體的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，所得植物表達(dá)載體為pEGM，植物表達(dá)載體的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的植物表達(dá)載體，其特征在于，所述植物表達(dá)載體由以下方式構(gòu)建得到：

（1）將植物載體pEGAD用PacI、KpnI進(jìn)行雙酶切，回收大片段，得到pEGAD-PacI/KpnI；

（2）在pAM的上游加入PacI的酶切位點(diǎn)ttaattaa，在pAM的下游加入KpnI的酶切位點(diǎn)ggtacc，合成質(zhì)粒pUC57-pAM，用PacI、KpnI、BspQI三個(gè)酶進(jìn)行酶切反應(yīng)，回收片段，得到pAM-PacI/KpnI；

（3）用DNA連接酶將片段pEGAD-PacI/KpnI與片段pAM-PacI/KpnI連接起來(lái)，構(gòu)建得到植物表達(dá)載體pEGM。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的植物表達(dá)載體，其特征在于，所述pAM基因設(shè)在所述植物載體的RB與LB之間，排列方向?yàn)镽B→LIR→C1:C2→SIR→終止子→克隆位點(diǎn)→啟動(dòng)子→LIR→LB。

7.一種如權(quán)利要求3～6中任一項(xiàng)所述的植物表達(dá)載體在制備轉(zhuǎn)基因植物中的應(yīng)用。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述植物為煙草葉。