[發(fā)明專利]一種適用于陸地棉的基因精準(zhǔn)高效編輯的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110583896.0
• 申請(qǐng)日: 2021-05-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113337539A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-09-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 金雙俠;張獻(xiàn)龍;余露;王瓊瓊
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/84
• 分類號(hào): C12N15/84;A01H5/00;A01H6/60
• 代理公司: 北京國(guó)坤專利代理事務(wù)所(普通合伙) 11491
• 代理人: 張國(guó)棟

1.一種適用于陸地棉的基因精準(zhǔn)高效編輯的方法，其特征在于：所述該載體的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

2.一種適用于陸地棉的基因精準(zhǔn)高效編輯的方法，其特征在于：所述該載體的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，該載體通過(guò)下列步驟制備獲得：

1)、獲得目的序列復(fù)制子元件(BeSRL)，其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：3所示，具體地，該目的序列通過(guò)以下步驟制備獲得：

(1)、利用XbaⅠ對(duì)SEQ ID NO：1所示的pRGEB32-GhU6.7-NPTⅡ(序列表SEQ ID NO：1)載體進(jìn)行酶切；

(2)、與復(fù)制子序列元件BeSRL目的序列進(jìn)行連接；

(3)、通過(guò)測(cè)序驗(yàn)證，得到如SEQ ID NO：4所示的適用于陸地棉的基因敲入的基礎(chǔ)載體BeYDV-pRGEB32-1；

2)、獲得目的序列復(fù)制子元件(ULIR)，其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：5所示，具體地，該目的序列通過(guò)以下步驟制備獲得：

(1)、Afe I對(duì)SEQ ID NO：4所示的BeYDV-pRGEB32-1載體進(jìn)行酶切；

(2)、與復(fù)制子序列元件BeSRL目的序列進(jìn)行連接；

(3)、通過(guò)測(cè)序驗(yàn)證，得到如SEQ ID NO：2所示的適用于陸地棉的基因敲入的高效轉(zhuǎn)化載體BeYDV-Cas9。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種適用于陸地棉的基因精準(zhǔn)高效編輯的方法，其特征在于：所述的載體BeYDV-Cas9在陸地棉基因組編輯中的應(yīng)用。