[發明專利]一種利用木糖產三乙酸內酯的解脂耶氏酵母工程菌及應用

有效

• 申請號: 202110582048.8
• 申請日: 2021-05-26
• 公開（公告）號: CN113403213B
• 公開（公告）日: 2022-11-18
• 發明（設計）人: 鄧利;黃曉斕;劉歡;王芳
• 申請（專利權）人: 北京化工大學
• 主分類號: C12N1/19
• 分類號: C12N1/19;C12N15/53;C12N15/54;C12N15/81;C12P17/06;C12R1/645
• 代理公司: 北京瑞盛銘杰知識產權代理事務所(普通合伙) 11617
• 代理人: 栗華楠

1.一種解脂耶氏酵母基因工程菌，其特征在于，所述工程菌以解脂耶氏酵母為出發菌株，導入2-吡喃酮合成酶編碼基因gh2ps，同時過表達木糖還原酶編碼基因、木糖醇脫氫酶編碼基因以及木酮糖激酶編碼基因，得到重組解脂耶氏酵母工程菌。

2.如權利要求1所述的一種解脂耶氏酵母基因工程菌，其特征在于，2-吡喃酮合成酶編碼基因、木糖還原酶編碼基因、木糖醇脫氫酶編碼基因以及木酮糖激酶編碼基因的表達方式為質粒表達或基因組整合表達。

3.如權利要求2所述的一種解脂耶氏酵母基因工程菌，其特征在于，所述質粒表達采用的表達載體為PYLXP’質粒。

4.如權利要求1所述的一種解脂耶氏酵母基因工程菌，其特征在于，2-吡喃酮合成酶編碼基因gh2ps，核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.1所示；

木糖還原酶編碼基因為內源基因yl.xyl1，核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.2所示；

木糖醇脫氫酶編碼基因為內源基因yl.xyl2，核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.3所示；

木酮糖激酶編碼基因為內源基因yl.xyl3，核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.4所示。

5.如權利要求1所述的一種解脂耶氏酵母基因工程菌，其特征在于，出發菌株為解脂耶氏酵母po1f。

6.權利要求1所述一種解脂耶氏酵母基因工程菌在生產三乙酸內酯中的應用。

7.如權利要求6所述的應用，其特征在于，采用上述解脂耶氏酵母基因工程菌生產三乙酸內酯的方法，具體如下：

將工程菌種子液按1-5％接種量接入含木糖發酵培養基中，25-32℃，200-250rpm，發酵5-7天。

8.如權利要求7所述的應用，其特征在于，在發酵初始添加PBS控制發酵體系的pH在5-7.5；在發酵24h左右，添加終濃度為1-3mg/L的淺藍菌素。

9.如權利要求7所述的應用，其特征在于，采用質粒表達獲得的工程菌的發酵培養基組成為：35-50g/L木糖，1-2g/L YNB，0.5-2g/L硫酸銨，0.4-1g/L CSM-LEU，其余為水；

采用基因組整合表達獲得的工程菌的發酵培養基組成為：木糖35-50g/L，Tryptone15-25g/L，Yeast Extract 5-15g/L，其余為水，pH為5-7.5；

采用基因組整合表達獲得的工程菌的發酵培養基組成為：玉米秸稈水解液25-35mL,Tryptone 15-25g/L,Yeast Extract 5-15g/L，其余為水，pH5-7.5。

10.如權利要求9所述的應用，其特征在于，培養基中添加1-10g/L的甘油。