[發(fā)明專利]一種利用木糖產(chǎn)三乙酸內(nèi)酯的解脂耶氏酵母工程菌及應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110582048.8
• 申請日: 2021-05-26
• 公開（公告）號: CN113403213B
• 公開（公告）日: 2022-11-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 鄧利;黃曉斕;劉歡;王芳
• 申請（專利權(quán)）人: 北京化工大學(xué)
• 主分類號: C12N1/19
• 分類號: C12N1/19;C12N15/53;C12N15/54;C12N15/81;C12P17/06;C12R1/645
• 代理公司: 北京瑞盛銘杰知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11617
• 代理人: 栗華楠

1.一種解脂耶氏酵母基因工程菌，其特征在于，所述工程菌以解脂耶氏酵母為出發(fā)菌株，導(dǎo)入2-吡喃酮合成酶編碼基因gh2ps，同時過表達木糖還原酶編碼基因、木糖醇脫氫酶編碼基因以及木酮糖激酶編碼基因，得到重組解脂耶氏酵母工程菌。

2.如權(quán)利要求1所述的一種解脂耶氏酵母基因工程菌，其特征在于，2-吡喃酮合成酶編碼基因、木糖還原酶編碼基因、木糖醇脫氫酶編碼基因以及木酮糖激酶編碼基因的表達方式為質(zhì)粒表達或基因組整合表達。

3.如權(quán)利要求2所述的一種解脂耶氏酵母基因工程菌，其特征在于，所述質(zhì)粒表達采用的表達載體為PYLXP’質(zhì)粒。

4.如權(quán)利要求1所述的一種解脂耶氏酵母基因工程菌，其特征在于，2-吡喃酮合成酶編碼基因gh2ps，核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.1所示；

木糖還原酶編碼基因為內(nèi)源基因yl.xyl1，核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.2所示；

木糖醇脫氫酶編碼基因為內(nèi)源基因yl.xyl2，核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.3所示；

木酮糖激酶編碼基因為內(nèi)源基因yl.xyl3，核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.4所示。

5.如權(quán)利要求1所述的一種解脂耶氏酵母基因工程菌，其特征在于，出發(fā)菌株為解脂耶氏酵母po1f。

6.權(quán)利要求1所述一種解脂耶氏酵母基因工程菌在生產(chǎn)三乙酸內(nèi)酯中的應(yīng)用。

7.如權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，采用上述解脂耶氏酵母基因工程菌生產(chǎn)三乙酸內(nèi)酯的方法，具體如下：

將工程菌種子液按1-5％接種量接入含木糖發(fā)酵培養(yǎng)基中，25-32℃，200-250rpm，發(fā)酵5-7天。

8.如權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，在發(fā)酵初始添加PBS控制發(fā)酵體系的pH在5-7.5；在發(fā)酵24h左右，添加終濃度為1-3mg/L的淺藍菌素。

9.如權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，采用質(zhì)粒表達獲得的工程菌的發(fā)酵培養(yǎng)基組成為：35-50g/L木糖，1-2g/L YNB，0.5-2g/L硫酸銨，0.4-1g/L CSM-LEU，其余為水；

采用基因組整合表達獲得的工程菌的發(fā)酵培養(yǎng)基組成為：木糖35-50g/L，Tryptone15-25g/L，Yeast Extract 5-15g/L，其余為水，pH為5-7.5；

采用基因組整合表達獲得的工程菌的發(fā)酵培養(yǎng)基組成為：玉米秸稈水解液25-35mL,Tryptone 15-25g/L,Yeast Extract 5-15g/L，其余為水，pH5-7.5。

10.如權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，培養(yǎng)基中添加1-10g/L的甘油。