[發明專利]一種出血熱疫苗生產及純化工藝

有效

• 申請號: 202110581505.1
• 申請日: 2021-05-27
• 公開（公告）號: CN113337475B
• 公開（公告）日: 2022-04-12
• 發明（設計）人: 陳韋韋;陳宣洪;周富昌;周琪;周鴻飛;周潔
• 申請（專利權）人: 羅益（無錫）生物制藥有限公司
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;A61K39/12;A61P31/14
• 代理公司: 廣州市紅荔專利代理有限公司 44214
• 代理人: 黃新民

1.一種出血熱疫苗生產及純化工藝，其特征在于：包括以下步驟：

(1)細胞傳代：取Vero細胞使用細胞培養液復蘇培養并傳代擴增；

(2)病毒感染：對傳代擴增后的Vero細胞進行出血熱病毒感染；

(3)病毒液獲取：在出血熱病毒感染Vero細胞后進行換液，再收獲病毒液；

(4)病毒液滅活：使用滅活劑對病毒液進行病毒滅活，得到滅活病毒收獲液；

(5)連續流離心：連續流離心滅活病毒收獲液去除雜質，離心后過濾，留上清液，去除沉淀；

(6)超濾濃縮：將上清液進行超濾濃縮，得到濃縮液；

(7)層析上柱：將濃縮液上層析柱，收取第一峰的洗脫液，合并洗脫液，加入穩定劑及防腐劑，即為出血熱病毒原液；

(8)過濾：將出血熱病毒原液過濾后保存；

(9)配制：將出血熱病毒原液稀釋，加入保護劑和防腐劑，調節pH，混勻后除菌過濾，補加佐劑，混勻即得出血熱疫苗；

步驟(1)中所述細胞培養液由牛血清、MEM溶液和添加劑組成；所述添加劑包括：30-40mg/L肌醇、20-30mg/L乙二胺四乙酸鐵鈉、20-50mg/L水解大豆蛋白、15-45mg/L磷脂酰絲氨酸和35-40mg/LN-乙酰神經氨酸；

所述肌醇和磷脂酰絲氨酸的重量比為6-8:3-8；所述水解大豆蛋白、磷脂酰絲氨酸和N-乙酰神經氨酸的重量比為4-10:3-9:7-8。

2.根據權利要求1所述的生產及純化工藝，其特征在于：步驟(2)中所述的出血熱病毒為I型或II型出血熱病毒。

3.根據權利要求1所述的生產及純化工藝，其特征在于：步驟(4)中所述滅活劑為β-丙內酯。

4.根據權利要求1所述的生產及純化工藝，其特征在于：步驟(6)中所述超濾濃縮的濃縮倍數為55-60倍。

5.根據權利要求1所述的生產及純化工藝，其特征在于：步驟(9)中所述出血熱病毒原液為I型出血熱病毒原液和II型出血熱病毒原液的合并液。