[發明專利]成人Ph-B-ALL預后相關基因拷貝數變異檢測試劑盒及檢測方法在審
| 申請號： | 202110580112.9 | 申請日： | 2021-05-26 |
| 公開（公告）號： | CN113373221A | 公開（公告）日： | 2021-09-10 |
| 發明（設計）人： | 房秋云;秘營昌;弓曉媛;王建祥;李艷;王君;劉凱奇 | 申請（專利權）人： | 房秋云 |
| 主分類號： | C12Q1/6886 | 分類號： | C12Q1/6886;C12Q1/6858;C12N15/11 |
| 代理公司： | 天津英揚昊睿專利代理事務所(普通合伙) 12227 | 代理人： | 吳揚 |
| 地址： | 300000 天津市河西*** | 國省代碼： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 成人 ph all 預后 相關 基因 拷貝 變異 檢測 試劑盒 方法 | ||
1.一種成人Ph-B-ALL預后相關基因拷貝數變異檢測試劑盒，其特征在于包括探針、緩沖液、雜交混合液、連接酶混合液，所述探針為13個，13個探針分別為IKZF1、EBF1、CDKN2A、CDKN2B、PAX5、ETV6、BTG1、RB1、SHOX-AREA、CRLF2、CSF2RA、IL3RA、P2RY8探針。
2.一種成人Ph-B-ALL預后相關基因拷貝數變異檢測方法，其特征在于利用MLPA技術進行檢測，其具體檢測方法為：
一、標本采集及單個核細胞的分離并提取骨髓單個核細胞的DNA；二、MLPA步驟：
(1)DNA變性：取5ul(20ng/ul)的樣品，98℃處理5min，溫度降到25℃暫停；
(2)探針與DNA的雜交：取出上述步驟的樣品，降至室溫，加入3ul的雜交混合液，然后升溫至95℃，保持1分鐘，在進行60℃溫浴18h，得到雜交探針；
(3)進行雜交探針的連接：
A、PCR儀降到54℃，打開管蓋；
B、加入32ul連接酶混合液，54℃溫浴15分鐘；
C、98℃加熱5min滅火連接酶后20℃暫停，得到連接探針；
(4)進行連接探針的PCR擴增：
A、從PCR儀中取出樣品，降至室溫；
B、加入10ul PCR混合液；
C、PCR擴增，95℃-30s，60℃-30s，72℃-60s，35個循環后，72℃-20min，15℃暫停；
(5)PCR產物的毛細管電泳：取0.5ul樣品、0.5ulLIZ SIZE Standard、9ul Hi-DiTMFormamide進行操作。
(6)結果分析：所得結果通過Coffalyser軟件進行半定量分析，了解目的基因的片段缺失或擴增情況。
3.按照權利要求2所述的一種成人Ph-B-ALL預后相關基因拷貝數變異檢測方法，其特征在于所述雜交混合液為1.5ul SASLAS probemix、1.5ulMLPA緩沖液。
4.按照權利要求2所述的一種成人Ph-B-ALL預后相關基因拷貝數變異檢測方法，其特征在于所述32ul連接酶混合液為3ul ligase bufferA、3ul ligase bufferB、25ul water、1ul ligase-65。
5.按照權利要求2所述的一種成人Ph-B-ALL預后相關基因拷貝數變異檢測方法，其特征在于所述PCR混合液為7.5ul water、2ul PCRPrimerMix、0.5ul SALSAPolymerse。
6.按照權利要求1所述的一種成人Ph-B-ALL預后相關基因拷貝數變異檢測試劑盒，其特征在于所述探針上具有熒光標記和通用引物，所述通用引物為IKZF1、EBF1、CDKN2A、CDKN2B、PAX5、ETV6、BTG1、RB1、SHOX-AREA、CRLF2、CSF2RA、IL3RA、P2RY8。
7.按照權利要求1所述的一種成人Ph-B-ALL預后相關基因拷貝數變異檢測試劑盒，其特征在于試劑盒為MLPA(P335)試劑盒。
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