[發(fā)明專利]一種膜蛋白的純化方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202110580012.6 | 申請日： | 2021-05-26 |
| 公開（公告）號： | CN113278048B | 公開（公告）日： | 2023-03-10 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 王靜;易汪雪 | 申請（專利權(quán)）人： | 武漢華美生物工程有限公司 |
| 主分類號： | C07K1/36 | 分類號： | C07K1/36;C07K1/30;C07K1/22 |
| 代理公司： | 武漢智嘉聯(lián)合知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 42231 | 代理人： | 丁倩 |
| 地址： | 430000 湖北省武漢市東湖開發(fā)區(qū)高新*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 膜蛋白 純化 方法 | ||
1.一種膜蛋白的純化方法，其特征在于，所述方法由以下步驟組成：
步驟1、誘導(dǎo)目的膜蛋白在宿主細(xì)胞中表達(dá)；
步驟2、破碎宿主細(xì)胞，490 g～1000 g低速離心后取上清，將上清于30000 g高速離心1h后取沉淀；
步驟3、用重懸緩沖液重懸步驟2所得沉淀，然后加入去垢劑，震蕩溶解后離心，取上清；
步驟4、將步驟3所得上清采用親和層析純化，使用包含十二烷基-β-D-麥芽糖苷、咪唑和甘油的洗脫緩沖液進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，超濾離心后即得目的膜蛋白；
步驟1中，所述宿主細(xì)胞為原核細(xì)胞和/或真核細(xì)胞；
步驟2中，當(dāng)宿主細(xì)胞為原核細(xì)胞時，于4 ℃，490 g低速離心15 min后取上清；當(dāng)宿主細(xì)胞為真核細(xì)胞時，于4 ℃，1000 g低速離心15 min后取上清；
步驟3中，所述去垢劑選自：體積比1：0.1的十二烷基-β-D-麥芽糖苷和膽固醇半琥珀酸三鹽；或體積比1：0.2的1-十八烷酰基-sn-甘油-3-磷酸-（1′
步驟1中，所述目的膜蛋白選自：內(nèi)皮素受體B蛋白、鼠疫耶爾森菌毒力蛋白、B淋巴細(xì)胞抗原中的任意一種。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的純化方法，其特征在于，步驟3中，所述重懸緩沖液為BufferA，包括：Tris緩沖液，無機鹽，甘油和蛋白酶抑制劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的純化方法，其特征在于，所述BufferA中包括：20～50 mMTris, pH 7.0-7.5，50～200 mM NaCl，體積分?jǐn)?shù)1～10% 甘油和蛋白酶抑制劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的純化方法，其特征在于，步驟4中，所述親和層析純化的步驟具體為：使用包含Tris緩沖液、無機鹽、十二烷基-β-D-麥芽糖苷和甘油的Buffer B平衡層析柱，然后向?qū)游鲋屑尤氩襟E3所得上清，依次用包含Tris緩沖液、無機鹽、十二烷基-β-D-麥芽糖苷、甘油和20～500 mM 咪唑的洗脫緩沖液除雜洗脫。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的純化方法，其特征在于，所述Buffer B中包括：20～50 mMTris, pH 7.0-7.5，50～200 mM NaCl，0.01～0.1% 十二烷基-β-D-麥芽糖苷和1～10% 甘油。
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