[發(fā)明專利]煙草3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶基因及應(yīng)用在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202110578550.1 | 申請日： | 2021-05-26 |
| 公開（公告）號： | CN113278636A | 公開（公告）日： | 2021-08-20 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 曾婉俐;李雪梅;朱保昆;向海英;楊光宇;劉欣;李晶;黃海濤;蔣佳芮;楊文武 | 申請（專利權(quán)）人： | 云南中煙工業(yè)有限責(zé)任公司 |
| 主分類號： | C12N15/53 | 分類號： | C12N15/53;C12N9/04;C12N15/82;A01H5/00;A01H6/82 |
| 代理公司： | 北京維澳專利代理有限公司 11252 | 代理人： | 王立民 |
| 地址： | 650231 云*** | 國省代碼： | 云南;53 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 煙草 羥基 甲基 戊二酰 輔酶 還原酶 基因 應(yīng)用 | ||
1.3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶基因，其特征在于，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的煙草3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶基因，其特征在于，煙草3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶基因的編碼蛋白，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的煙草3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶基因，其特征在于，煙草3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶基因的PCR擴增制備方法，包括如下步驟：
(1)提取基因組，并反轉(zhuǎn)錄為cDNA備用；
(2)設(shè)計PCR擴增用引物，并進行PCR擴增，具體引物序列設(shè)計如下：
NtHMGCR11-F：5’-ATGGACGTTCGCCGGCGAC-3’，
NtHMGCR11-R：5’-CAACAGATATATAACAGAAGCGATC-3’。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的煙草3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶基因，其特征在于，在步驟(1)中提取基因組時，以煙草品種紅花大金元葉片為樣品。
5.一種煙草3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶基因的應(yīng)用，其特征在于，利用上述權(quán)利要求1至4中任一項的煙草3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶基因，該基因表達的蛋白與植物葉片中甾醇含量相關(guān)，降低該蛋白表達后，葉片中甾醇含量明顯降低。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的煙草3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶基因的應(yīng)用，其特征在于，利用基因沉默技術(shù)、或者基因超表達方法，通過調(diào)節(jié)煙草3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶基因的表達量，來調(diào)節(jié)控制煙葉中甾醇含量情況。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的煙草3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶基因的應(yīng)用，其特征在于，通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)、瞬時表達技術(shù)或基因組編輯技術(shù)，構(gòu)建含有煙草3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶基因的病毒誘導(dǎo)沉默載體、RNAi干涉載體、超表達載體或基因組編輯載體，轉(zhuǎn)化煙草，篩選獲得甾醇含量變化的煙草新品種。
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