[發明專利]一種高產脲酶的枯草芽孢桿菌及其應用方法

在審

• 申請號: 202110576781.9
• 申請日: 2021-05-26
• 公開（公告）號: CN113278558A
• 公開（公告）日: 2021-08-20
• 發明（設計）人: 周志強;韋航;梁樹華;羅石林;盧運琨;陸迪;韋函忠;侯守海
• 申請（專利權）人: 南寧市拜歐生物工程有限責任公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/02;C12N9/80;B09C1/10;C12R1/125
• 代理公司: 北京化育知識產權代理有限公司 11833
• 代理人: 秦麗

1.一種高產脲酶的枯草芽孢桿菌及其應用方法，其特征在于：所述菌株為枯草芽孢桿菌，該菌能夠生產脲酶，其主要應用于治理被重金屬污染的土壤，所述菌株是從如下方法得到：從采集的重金屬污染的土壤樣品中分離出六株枯草芽孢桿菌在37℃培養36h-48h后，對六株枯草芽孢桿菌進行生物量和脲酶活性的測定，得到一株脲酶減量較高、生長最佳的菌株，命名為B-0，作為出發菌株；

將B-0進行培養，并且按照稀釋涂布法稀釋至105cfu/mL，取菌液0.1mL均勻涂于無菌的空平板中，待風干后進行N+離子束注入，N+離子束注入劑量為(80、125、170、215、260)×2.6×1013N+/cm2，N+離子束注入能量為15keV。輻照結束后用1mL無菌水洗滌細胞，按5倍稀釋法稀釋后涂入平板培養基，37℃倒置培養24h，待挑取單菌落，搖瓶檢測，篩選出其中脲酶活性最強且生長最佳的那一株菌株，命名為枯草芽孢桿菌S-1。

2.根據權利要求1所述的一種高產脲酶的枯草芽孢桿菌及其應用方法，其特征在于：將枯草芽孢桿菌活化，在30～42℃下培養24～60h；

其中，發酵培養基為：碳源12～60g/L，氮源12～48g/L，無機鹽為1～9g/L，pH6.5～8.0。

3.根據權利要求2所述的一種高產脲酶的枯草芽孢桿菌及其應用方法，其特征在于：所述的碳源為葡萄糖。

4.根據權利要求2所述的一種高產脲酶的枯草芽孢桿菌及其應用方法，其特征在于：所述的氮源為酵母粉、牛肉膏、蛋白胨、尿素、硫酸銨中的至少一種。

5.根據權利要求2所述的一種高產脲酶的枯草芽孢桿菌及其應用方法，其特征在于：所述的無機鹽為磷酸鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽中的任意一種或者幾種的組合。

6.根據權利要求1所述的一種高產脲酶的枯草芽孢桿菌及其應用方法，其特征在于：將所述的枯草芽孢桿菌進行活化，在37℃下發酵24h，在發酵過程中，通氣比為2.5v/vm、攪拌300rpm，其中，所述的發酵培養基為：

葡萄糖32g/L，蛋白胨18.8g/L，磷酸二氫銨5.3g/L，氯化鈣2.5g/L，尿素15.9g/L，無水硫酸鎂5g/L，其余為水，pH＝7.8。