[發明專利]一種MALDI TOF-MS檢測生殖道病原體的核酸指紋圖譜庫的制備方法

有效

• 申請號: 202110576512.2
• 申請日: 2021-05-26
• 公開（公告）號: CN113355456B
• 公開（公告）日: 2022-09-30
• 發明（設計）人: 李維;鄔文燕;張雪蓮;張海燕;馬慶偉
• 申請（專利權）人: 北京毅新博創生物科技有限公司;重慶市急救醫療中心
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/689;C12Q1/6895;C12Q1/686;C12Q1/6806;C12Q1/14;C12Q1/04;C12N15/11
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本發明提供一種用于飛行時間質譜法檢測8種生殖道病原菌及兩種人乳頭瘤病毒分型特定位點的核酸指紋圖譜庫的制備方法，所述生殖道病原菌包括金黃色葡萄球菌、B族鏈球菌、淋病奈瑟菌、陰道加德納菌、白色念珠菌、生殖支原體、解脲支原體、沙眼衣原體以及HPV16、HPV18病毒分型。本發明首次提出利用多重PCR結合臨床質譜實現對10種生殖道病原體的檢測提供新的方法，并綜合了多重PCR、單堿基延伸、質譜檢測等技術為一體，建立了核酸指紋圖譜庫的制備方法，該模型既可通過PCR技術放大檢測模板，又可通過質譜技術檢測微量樣本，綜合了兩種技術的優點，遠遠優于單獨使用PCR檢測病原體特定片段，具有較高的檢測靈敏度。

技術領域

本發明屬于分子生物學檢測領域，涉及一種利用激光飛行時間質譜技術快速鑒定10種生殖道病原體的核酸指紋圖譜庫的制備方法。

背景技術

據世界衛生組織最新調查報告顯示，對于成年女性而言，最常見的疾病不是感冒，而是生殖道感染，患病幾率高達90％以上；最常見的不適癥狀不是發熱、咳嗽、頭痛等，而是陰部瘙癢、異味、疼痛，以及尿頻，尿急等。而且女性許多其它疾病的發生也與生殖系統的功能異常密切相關，如骨質疏松、冠心病、糖尿病、黃褐斑等。從某種意義上講，生殖系統的問題關乎女人一生的健康和幸福，也可以說是女人的“百病之源”。女性生殖道感染是發生在女性從外陰口至子宮這段腔道因細菌、病毒、寄生蟲等病原微生物引起的感染性疾病，主要包括陰道炎(念珠菌性、滴蟲性、老年性、細菌性陰道病)、淋病、宮頸炎(息肉、那氏囊腫)、盆腔炎等，是婦女的常見病，幾乎每個成年女性和部分少女都曾有過。女性生殖道感染具有患病率高、無癥狀比例高、不就診的比例高和得不到合理治療比例高的特點，導致各種嚴重并發癥和后遺癥。女性生殖健康水平直接影響著人口素質，不容忽視。女性生殖道感染已經成為全球范圍內危害嚴重的重要傳染病之一。女性生殖感染相關因素由于女性生殖道因解剖、生理、性活動、分娩和衛生習慣等多種因素影響，易發生多種感染。

生殖道感染是婦科常見疾病，由細菌、病毒、白色假絲酵母菌、原蟲、支原體、衣原體等多種病原體的侵襲所致，包括女性下生殖道的外陰炎、陰道炎、宮頸炎和上生殖道的盆腔炎性疾病。生殖道感染具流行范圍廣、復發率高、就診率低的特點，是最常見的婦科疾病，國內患病率高達42.9％。生殖道感染若得不到及時診斷和正確治療，可增加性傳播疾病感染的風險，會引起異常子宮出血、不孕癥、異位妊娠、慢性盆腔痛、流產、胎膜早破、早產、死胎、死產及先天性感染等并發癥及后遺癥，不僅危害婦女健康，還可危害胎兒及新生兒。生殖道感染已成為嚴重影響女性健康的社會公共衛生問題，給家庭及社會帶來嚴重負擔。

生殖道微生物菌群種類繁多，協調共生、相互制約，可以與宿主發生一系列復雜的相互作用，顯著影響生殖道的生理機能和免疫功能，并在抵御機會性病原體的定植過程中發揮“第一道防線”作用。生殖道微生態環境的不平衡可導致女性趨向于發生各種婦科疾病，如陰道炎癥、不孕不育、宮頸上皮內瘤變及宮頸癌等等。陰道炎可由一種病原體所致，單純的病原體診治相對簡單，但我國陰道炎中有 50％左右為混合性感染，利用生殖道微生態系統檢測有利于精準診治陰道混合性感染。近年來，隨著女性不孕癥的患病率逐年升高，不孕癥越來越受到人們的關注。不孕癥的發病機制復雜，其中女性生殖道微生物群落失衡與女性不孕不育密切相關。通過臨床檢測與評價女性陰道微生態平衡，對于女性不孕不育的診治具有重要意義。高危型人乳頭瘤病毒(HPV)持續感染是醫學上公認的宮頸癌發生的主要原因和必要條件，其中HPV16和HPV18的感染與宮頸癌的發病密切相關。但感染HPV后僅5％-10％最終發展為宮頸癌前病變甚至宮頸癌。目前發現，生殖道微生態的不平衡可能是造成HPV持續感染繼而發生宮頸病變的協同因素。重建及保護生殖道微生態平衡，尤其是維持乳桿菌為主、陰道正常的酸性環境，為HPV感染及相關宮頸疾病治療提供研究的新方向。

生殖道病原體是人體重要的微生態體系之一，它們與宿主、環境之間構成了相互制約、相互協調的微生態平衡，這種動態平衡在維護女性生殖道健康中起到關鍵作用。女性生殖道病原體包括金黃色葡萄球、溶血性鏈球菌、淋病奈瑟菌、B族鏈球菌、大腸埃希菌、陰道加德納菌、白色假絲酵母菌、支原體、沙眼衣原體和HPV等。