[發明專利]一種人乳頭瘤病毒11型L1蛋白的抗體及其制備方法

在審

• 申請號: 202110575487.6
• 申請日: 2021-05-26
• 公開（公告）號: CN114957452A
• 公開（公告）日: 2022-08-30
• 發明（設計）人: 虎麗興;閆梅;張瓊月;李坤;徐嵐;吳雙;陳丹;班靖洋;夏麗;陳健平;劉勇
• 申請（專利權）人: 江蘇瑞科生物技術股份有限公司;北京安百勝生物科技有限公司
• 主分類號: C07K16/08
• 分類號: C07K16/08;C12N15/13;G01N33/577;G01N33/569;G01N33/58;G01N33/543
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本發明提供了一種可特異性識別人乳頭瘤病毒11型的L1蛋白(HPV11L1)和/或VLP(HPV11VLP)的單克隆抗體。本發明提供的特異性單克隆抗體與其它8種型別HPV(HPV6、16、18、31、33、45、52、58)L1蛋白和/或VLP無明顯交叉反應，具有高特異性，高靈敏度，高準確率、高安全性的優點。可以用于準確檢測疫苗種中HPV11的L1蛋白和/或VLP有生物活性疫苗的含量，在臨床檢測和疫苗生產過程中將會得到廣泛應用。

技術領域

本發明涉及分子病毒學和免疫學領域，更具體地，本發明涉及人乳頭瘤病毒11型雜交瘤細胞系，及一種人乳頭瘤病毒11型L1蛋白和/或VLP的單克隆抗體的制備方法，及其制備的診斷試劑盒。

背景技術

人類乳頭瘤病毒(Human Papillomavirus，簡稱HPV)是一組無包膜的小DNA病毒，感染人皮膚及粘膜上皮組織，可誘發產生疣狀增生乃至引發良性或惡性腫瘤。HPV亞型極多，目前已分離出130余種，不同的型別引起不同的臨床表現。根據其與腫瘤發生的關系可分為高危型HPV(HPV16，18，31，33，35，39，45，51，52，56，58等)和低危型HPV(HPV6， 11，40，42，43，44，54等)。

低危型不整合于細胞基因組中，主要引起皮膚黏膜的疣狀增生，表現為尖銳濕疣、扁平疣等良性病變。尖銳濕疣是國家衛生部規定要求監測的八大性傳播疾病之一，它的發病率僅次于淋病，由于病情易反復發作，傳染性極強，已經成為嚴重危及人們正常生活的常見性病之一。根據流行病學調查肛生殖器粘膜的HPV例如HPV6、11引起的病變占了總數的90％左右。因此，研制HPV11型疫苗將起到良好的預防尖銳濕疣等疾病病變的作用。

HPV的主要衣殼蛋白L1具有自組裝為空心病毒樣顆粒(Virus-Like Particle，VLP)的特征。 HPVVLP是由72個主要衣殼蛋白L1的五聚體構成的20面體立體對稱結構。VLP疫苗可通過分子生物學技術，表達病毒的一個或多個結構蛋白，這些結構蛋白具有天然的自主裝配能力，可形成與天然病毒顆粒相似的空間構型和抗原表位，但無病毒核酸，免疫原性強，無感染性，不存在滅活不完全或毒力回復的風險，并且表面有高密度的病毒抗原，保存了構象表位，可通過和全病毒疫苗一樣的途徑呈遞給免疫細胞，有效誘導機體免疫系統產生免疫保護反應，誘導高滴度的中和抗體。

在HPV疫苗研發過程中，需要進行型別鑒定、抗原含量檢測和體外效力測定。其方法均可以采用雙抗體夾心法ELISA。因此，在疫苗研究中，單克隆抗體是疫苗抗原質量控制的重要工具，尤其是具有特異性和中和活性的抗體，在疫苗研發中具有不可替代的重要作用。本發明提供了一種可針對HPV11的特異性和中和活性的單克隆抗體，利用其中的兩株制備的 ELISA檢測試劑盒可特異性地用于快速鑒別HPV11 L1蛋白，可廣泛應用于臨床檢測和目前疫苗廠家生產疫苗過程中的質檢，對HPV11型疫苗的研發和尖銳濕疣等疾病病變的預防具有重要意義。

發明內容

本發明第一個方面提供了能夠識別HPV11的L1蛋白和/或VLP的單克隆抗體以及產生該抗體的雜交瘤細胞系。

本發明第二個方面提供了一種單克隆抗體的制備方法。

本發明第三個方面提供了一種HPV11的L1蛋白和/或VLP的抗原檢測試劑盒的制備方法。

本發明第四個方面提供了一種用于檢測HPV11的雙抗體夾心ELISA試劑盒。

本發明是通過如下技術方案實現：