[發明專利]一種斯赤列指紋圖譜的構建方法

有效

• 申請號: 202110574691.6
• 申請日: 2021-05-26
• 公開（公告）號: CN113267582B
• 公開（公告）日: 2022-10-18
• 發明（設計）人: 王文靜;王葳;李大山;邵立東;李維熙;劉冬麗;李蓮慧;覃舒然
• 申請（專利權）人: 云南中醫藥大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/86
• 代理公司: 云南律翔知識產權代理事務所(普通合伙) 53219
• 代理人: 謝喬良

本發明屬于中藥藥物分析技術領域，公開了一種斯赤列指紋圖譜的構建方法，包括前處理、固相萃取、供試品溶液的制備及UPLC色譜測定等步驟。本發明提供斯赤列指紋圖譜構建方法精密度、重復性及穩定性良好。本發明提供的方法所構建的指紋圖譜可以反應不同產地和不同采收期的藥材質量，為更加準確、全面地評價和控制斯赤列的質量提供了穩定可靠的質量控制方法。

技術領域

本發明屬于民族藥藥物分析技術領域，具體涉及一種斯赤列指紋圖譜的構建方法。

背景技術

斯赤列（Sambucus adnata Wall.）為忍冬科接骨木屬植物，干燥地上部分或全草，又名血滿草、接骨藥、接骨丹、大血草等，主要分布于云南四川等地，具有抑制血管緊張素轉換酶及抗炎、鎮痛等生物活性，彝族等山區居民使用其治療風濕痹痛等。

中藥的藥效物質基礎是由多種活性成分構成，單一成分是不能顯示出中醫臨床用藥的整體療效，因此，僅以中藥部分活性成分的含量作為質量控制的指標是不足夠的，難以保證中藥的整體質量。中藥指紋圖譜能使中藥材的質量控制由原有的單一成分含量測定上升到能通過色譜的整體面貌反映中藥的整體組成與特征，能反應成分復雜的中藥因種植地氣候、地理特征、采摘時期等因素造成不同程度的中藥化學組分濃度分布的波動性，是評價中藥優劣、鑒別真偽、區分物質和確保其一致性和穩定性的有效方法，也是目前控制中藥材質量的有效手段和重要技術。斯赤列現有的生藥鑒別、顯微鑒別、理化鑒別及HPLC法測定其熊果酸、齊墩果酸成分含量等相關質量控制研究尚不足以支撐其深入開發，僅對熊果酸、齊墩果酸兩種成分進行定量分析，不能從整體上反應斯赤列的內在質量。目前，尚無斯赤列的指紋圖譜。

發明內容

本發明的目的在于提供一種斯赤列指紋圖譜的構建方法。

本發明的目的是這樣實現的，包括前處理、固相萃取、供試品溶液的制備及UPLC色譜測定等步驟，具體為：

（1）前處理：斯赤列打成粗粉，取粗粉1.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密量取溶劑，料液比為1:20~1:30，稱定重量，提取，放置至室溫，用溶劑補足減失的重量，過濾，用20.0 mL溶劑洗滌濾渣，濾液回收至干；

（2）固相萃取：將前處理得到的樣品加入5.0 mL水溶解得到藥材水溶液，使用Sep-Pak-C₁₈固相萃取(SPE)小柱，①SPE小柱的預處理：上樣前用甲醇活化SPE柱，然后用水替換滯留在柱中的甲醇，以使水溶液與柱中吸附劑表面有良好的接觸，在樣品加入前應保持濕潤；②上樣：加入藥材水溶液，利用抽真空的方法使樣品溶液進入SPE小柱吸附劑；③先淋洗，淋洗液為10%、20%、30%、50%、70%、90%、100%甲醇，除去極性大的雜質；④繼續洗脫，洗脫液為70%、90%、100%甲醇；

（3）供試品溶液的制備：收集洗脫溶液，回收溶劑，殘渣加甲醇定容至5 mL容量瓶中，以0.22 μm微孔濾膜濾過，即得供試品溶液；

（4）UPLC色譜測定：將供試品溶液進行色譜測定，色譜條件為：Waters AcquityBEH C18色譜柱（2.1×100 mm，1.7 μm），流速0.1~0.3 ml?min^-1，檢測波長200~250 nm，柱溫25~40°C，流動相乙腈(A)-0.1%磷酸溶液(B)進行梯度洗脫：

根據分析結果，構建斯赤列指紋圖譜。

步驟（1）中的提取為用冷浸提取24h或超聲提取15~45min或回流提取2 h；溶劑為甲醇、丙酮或水。

步驟（1）中的提取為用超聲提取30 min。

步驟（1）中的溶劑為甲醇。

步驟（1）中的料液比為1:25。

步驟（2）中淋洗液為50%甲醇，洗脫液為100%甲醇。