[發明專利]一種斯赤列指紋圖譜的構建方法

有效

• 申請號: 202110574691.6
• 申請日: 2021-05-26
• 公開（公告）號: CN113267582B
• 公開（公告）日: 2022-10-18
• 發明（設計）人: 王文靜;王葳;李大山;邵立東;李維熙;劉冬麗;李蓮慧;覃舒然
• 申請（專利權）人: 云南中醫藥大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/86
• 代理公司: 云南律翔知識產權代理事務所(普通合伙) 53219
• 代理人: 謝喬良

1.一種斯赤列指紋圖譜的構建方法，其特征在于包括前處理、固相萃取、供試品溶液的制備及UPLC色譜測定步驟，具體為：

（1）前處理：斯赤列打成粗粉，取粗粉1.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密量取甲醇，料液比為1:20~1:30，稱定重量，超聲提取，放置至室溫，用甲醇補足減失的重量，過濾，用20.0 mL甲醇洗滌濾渣，濾液回收至干；

（2）固相萃取：將前處理得到的樣品加入5.0 mL水溶解得到藥材水溶液，使用Sep-Pak-C₁₈固相萃取小柱，①SPE小柱的預處理：上樣前用甲醇活化SPE柱，然后用水替換滯留在柱中的甲醇，以使水溶液與柱中吸附劑表面有良好的接觸，在樣品加入前應保持濕潤；②上樣：加入藥材水溶液，利用抽真空的方法使樣品溶液進入SPE小柱吸附劑；③先淋洗，淋洗液為50%甲醇，除去極性大的雜質；④繼續洗脫，洗脫液為100%甲醇；

（3）供試品溶液的制備：收集洗脫溶液，回收溶劑，殘渣加甲醇定容至5 mL容量瓶中，以0.22 μm微孔濾膜濾過，即得供試品溶液；

（4）UPLC色譜測定：將供試品溶液進行色譜測定，色譜條件為：Waters Acquity BEHC18色譜柱2.1×100 mm，1.7 μm，流速0.1~0.3 ml?min^-1，檢測波長200~250 nm，柱溫25~40℃，流動相乙腈A- 0.1%磷酸溶液B進行梯度洗脫，洗脫程序為：

根據分析結果，構建斯赤列指紋圖譜。

2.根據權利要求1所述的斯赤列指紋圖譜的構建方法，其特征在于所述的步驟（1）中的超聲提取時間為15~45min。

3.根據權利要求1所述的斯赤列指紋圖譜的構建方法，其特征在于所述的步驟（1）中的提取為用超聲提取30 min。

4.根據權利要求1所述的斯赤列指紋圖譜的構建方法，其特征在于所述的步驟（1）中的料液比為1:25。

5.根據權利要求1所述的斯赤列指紋圖譜的構建方法，其特征在于所述的步驟（4）中流速為0.2 ml?min^-1。

6.根據權利要求1所述的斯赤列指紋圖譜的構建方法，其特征在于所述的步驟（4）中，檢測波長為202 nm。

7.根據權利要求1所述的斯赤列指紋圖譜的構建方法，其特征在于所述的步驟（4）中，柱溫為35℃。