[發明專利]雞白痢沙門氏菌和雞滑液囊支原體雙重平板凝集抗原及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202110574203.1
• 申請日: 2021-05-25
• 公開（公告）號: CN113265358B
• 公開（公告）日: 2022-04-29
• 發明（設計）人: 于新友;李峰;李天芝;苗立中;吳信明;王文秀
• 申請（專利權）人: 山東省濱州畜牧獸醫研究院
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;G01N33/531;G01N33/569;G01N33/68;C12R1/42;C12R1/35
• 代理公司: 重慶航圖知識產權代理事務所(普通合伙) 50247
• 代理人: 王貴君

本發明公開了一種雞白痢沙門氏菌和雞滑液囊支原體雙重平板凝集抗原及其制備方法和應用，制備方法為分別將雞白痢沙門氏菌C79?1和雞滑液囊支原體GX11?T復蘇傳代后制成種子菌液，再接種相應培養基擴大培養，收獲，分別經甲醛溶液滅活，濃縮，兩種菌液按一定體積配比，加入終濃度為質量分數為3％的結晶紫溶液染色和體積分數為10％的甘油，混勻分裝即得。本發明工藝方法簡單合理，成本低，穩定性好，制備的雙重平板凝集抗原經一次反應同時可檢測兩種疫病抗體，具有敏感性高，診斷快速，特異性強，凝集效果易于觀察等優點，顯著節約檢測時間和檢測費用，臨床可用于雞白痢和雞滑液支原體兩種抗體快速檢測，淘汰病雞，實現疾病凈化。

技術領域

本發明涉及獸醫診斷技術領域，尤其涉及一種雞白痢沙門氏菌和雞滑液囊支原體雙重平板凝集抗原，還涉及該雙重平板凝集抗原的制備方法和應用。

背景技術

雞白痢是由沙門氏菌引起的一種嚴重危害養雞業發展的細菌性傳染病。各品種和日齡雞均可感染，成年雞感染后癥狀輕微，僅表現為一過性生產性能下降，雛雞受到的危害更嚴重，發病后，死亡率高。可水平傳播，也能垂直傳播。雛雞感染多為種源垂直感染引起，通過定期檢測種雞，淘汰帶菌雞，降低垂直傳播風險，實現種源凈化，培育無雞白痢雞群可顯著降低雛雞發病率。目前，種雞白痢檢測凈化主要采用平板凝集試驗，全群陽性率不超過0.1％視為合格。

雞滑液囊支原體是禽支原體中重要的致病性菌之一，在我國分布廣泛，傳染性強，感染雞與火雞后引起滑液囊支原體病。臨床表現主要為滲出性關節滑膜炎和腱鞘炎，產蛋下降，傳染性強，易與多種病原混合感染，各品種和日齡雞均可感染。近年來臨床發病率增高，給養殖業造成了巨大的經濟損失。雞滑液囊支原體對多種抗生素敏感，對外界抵抗力弱，但易產生耐藥性。雞群感染后，很難徹底清除。一年四季均可發病，冬春季節多發。當前疫苗及藥物控制效果不佳。該病可水平傳播也能垂直傳播。同雞白痢一樣，雞滑液囊支原體病也可以通過種源傳播，通過淘汰陽性雞只，可切斷病原傳播途徑。最經濟實用的陽性雞篩選方式為平板凝集試驗，雞群通過多次檢測實現凈化。當前尚無商品化雞滑液囊支原體病平板凝集診斷抗原，更無雞白痢沙門氏菌和雞滑液囊支原體雙重平板凝集抗原。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的之一在于提供一種雞白痢沙門氏菌和雞滑液囊支原體雙重平板凝集抗原；本發明的目的之二在于提供一種該雙重平板凝集抗原的制備方法；本發明的目的之三在于提供一種該雙重平板凝集抗原的應用。

為達到上述目的，本發明提供如下技術方案：

1、雞白痢沙門氏菌和雞滑液囊支原體雙重平板凝集抗原，由雞白痢沙門氏菌C79-1和雞滑液囊支原體GX11-T制成，所述雞白痢沙門氏菌C79-1和雞滑液囊支原體GX11-T均在中國典型培養物保藏中心保藏，保藏編號分別為CVCC 79207、CVCC2960。

本發明優選的，所述雞白痢沙門氏菌C79-1和雞滑液囊支原體GX11-T的菌液體積比為2:3。

本發明優選的，所述雞白痢沙門氏菌C79-1的菌液濃度為1.0×10¹⁰CFU/mL；所述雞滑液囊支原體GX11-T的菌液濃度為1.0×10¹¹ccu/mL。

2、所述的雞白痢沙門氏菌和雞滑液囊支原體雙重平板凝集抗原的制備方法，包括以下步驟：

a)制備雞白痢沙門氏菌C79-1抗原；

b)制備雞滑液囊支原體GX11-T抗原；

c)將步驟a)中制備的雞白痢沙門氏菌C79-1抗原和步驟b)中制備的雞滑液囊支原體抗原按2:3體積配比，加入染色劑，加入保護劑，均質分裝保存。

本發明優選的，步驟a)中制備雞白痢沙門氏菌C79-1抗原的方法為：

(1)將雞白痢沙門氏菌C79-1菌種經復蘇繁殖獲得種子菌液；