[發明專利]雞白痢沙門氏菌和雞滑液囊支原體雙重平板凝集抗原及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202110574203.1
• 申請日: 2021-05-25
• 公開（公告）號: CN113265358B
• 公開（公告）日: 2022-04-29
• 發明（設計）人: 于新友;李峰;李天芝;苗立中;吳信明;王文秀
• 申請（專利權）人: 山東省濱州畜牧獸醫研究院
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;G01N33/531;G01N33/569;G01N33/68;C12R1/42;C12R1/35
• 代理公司: 重慶航圖知識產權代理事務所(普通合伙) 50247
• 代理人: 王貴君

1.雞白痢沙門氏菌和雞滑液囊支原體雙重平板凝集抗原，其特征在于：由雞白痢沙門氏菌C79-1和雞滑液囊支原體GX11-T制成，所述雞白痢沙門氏菌C79-1和雞滑液囊支原體GX11-T均在中國典型培養物保藏中心保藏，保藏編號分別為CVCC 79207、CVCC2960；所述雞白痢沙門氏菌C79-1和雞滑液囊支原體GX11-T的菌液體積比為2：3；所述雞白痢沙門氏菌C79-1的菌液濃度為1.0×10¹⁰CFU/mL；所述雞滑液囊支原體GX11-T的菌液濃度為1.0×10¹¹ccu/mL。

2.權利要求1所述的雞白痢沙門氏菌和雞滑液囊支原體雙重平板凝集抗原的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

a)制備雞白痢沙門氏菌C79-1抗原；

b)制備雞滑液囊支原體GX11-T抗原；

c)將步驟a)中制備的雞白痢沙門氏菌C79-1抗原和步驟b)中制備的雞滑液囊支原體抗原按2:3體積配比，加入染色劑，加入保護劑，均質分裝保存。

3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟a)制備雞白痢沙門氏菌C79-1抗原的方法為：

(1)將雞白痢沙門氏菌C79-1菌種經復蘇繁殖獲得種子菌液；

(2)種子菌液擴大培養并滅活；

(3)滅活菌液加入2倍量的體積分數為95％乙醇，沉淀，離心棄上清，沉淀物重懸。

4.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，步驟a)制備雞白痢沙門氏菌C79-1抗原的方法具體為：

(1)種子菌液的制備：將雞白痢沙門氏菌C79-1菌種經TSB液體培養基復蘇繁殖后，接種TSA固體平板培養基，37℃培養20h后用馬丁液體培養基洗下菌苔，擴大培養后，再按5.0％體積比例接種含有馬丁肉湯培養基的發酵罐中發酵培養；所述固體平板培養基通過液體培養基中加入1.5％的純化瓊脂粉制成；

(2)細菌培養：經37℃高密度發酵培養18h后，收獲菌液，活菌計數，按加入甲醛至終濃度為體積分數0.3％，37℃滅活24h；

(3)抗原制備：滅活菌液中加入2倍量的體積分數為95％乙醇，沉淀3d，棄去部分上清，剩余部分8 000r/min離心10min棄去上清，沉淀物用體積分數為1％甲醛生理鹽水重懸，調整菌液濃度為1.0×10¹⁰CFU/mL。

5.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟b)中制備雞滑液囊支原體GX11-T抗原的方法為：

(1)將雞滑液囊支原體GX11-T菌種經復蘇繁殖獲得種子菌液；

(2)種子菌液連續增菌擴大培養后滅活；

(3)滅活菌液離心，重懸。