[發(fā)明專利]生物樣品中小分子物質檢測的前處理試劑

在審

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• 申請日: 2021-05-25
• 公開（公告）號: CN113419017A
• 公開（公告）日: 2021-09-21
• 發(fā)明（設計）人: 耿瑞;蔡克亞;劉亞娟;趙高嶺;張學東;孫江彥;高培麗;李賓賓;申業(yè)明
• 申請（專利權）人: 鄭州安圖生物工程股份有限公司
• 主分類號: G01N30/08
• 分類號: G01N30/08;G01N30/72
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 溫可睿

本發(fā)明涉及分析檢測技術領域，尤其涉及生物樣品中小分子物質檢測的前處理試劑。本發(fā)明提供的試劑中，包括磁珠懸液、活化液和洗脫液。以該試劑對生物樣品中待測物的提取效率高且提取回收率高，所需樣本量少，能夠高效、準確富集生物樣品中待測物。相比于免疫生物磁珠試劑盒，開封后的有效期長，更穩(wěn)定。并且，配套使用的儀器成本低，更有利于前處理流程的自動化。

技術領域

本發(fā)明涉及分析檢測技術領域，尤其涉及生物樣品中小分子物質檢測的 前處理試劑。

背景技術

生物樣品通常是指植物的花、葉、莖、根、種子等，動物(包括人)的體 液(如尿、血、唾液、膽汁、胃液、淋巴液及生物體的其他分泌液等)、毛發(fā)、 肌肉和一些組織器官(如胸腺、胰腺、肝、肺、腦、胃、腎等)以及各種微生 物。由于生物樣品的組成復雜，易對后續(xù)分析檢測產生干擾，因此需要在分 析檢測前進行樣品前處理。

生物樣品前處理，也稱為樣品制備、樣品凈化、樣品提取，是生物分析 過程中的重要組成部分。對于臨床檢驗用途的液相色譜串聯質譜(LC-MS/MS) 方法而言，樣品分析檢測之前對生物樣品進行處理是十分必要的。樣品前處 理的主要目的是從樣品基質中將一個或多個目標分析物與其他組分分離。生 物樣品前處理是LC-MS/MS方法開發(fā)和優(yōu)化極為關鍵的一環(huán)，因為樣品前處理 是高通量檢測的制約瓶頸以及分析誤差的主要來源。LC-MS/MS方法的失敗常 常是由于樣品前處理不當，導致目標分析物信號被抑制或者被生物基質中的 共存物干擾。

生物樣品具有以下特點：①生物樣品基質組成十分復雜，樣品中既含有 大分子的蛋白質、核酸，也含有小分子的脂肪、糖、尿酸、尿素等組分，還 有鈉鹽等鹽類，都可能對分析檢測產生干擾；②生物樣本中部分目標分析物 的濃度太低，如不進行必要的富集濃縮，儀器靈敏度可能無法達到；③生物 樣品與LC-MS/MS分析系統(tǒng)不兼容，如不進行前處理將損害分析系統(tǒng)，造成色 譜柱堵塞、離子源污染、產生基質效應等不良后果。因此生物樣品前處理的 目的在于：①凈化樣品，去除干擾成分(蛋白、磷脂、鹽等)；②減少基質 效應，提高靈敏度，濃縮樣品、提高質譜檢測信號；③保護進樣系統(tǒng)和色譜 柱；④簡化分析過程，提高檢測通量。總之，進行有效的樣品前處理是開展 靈敏、準確、高通量LC-MS/MS分析的前提。

目前，生物樣品進行LC-MS/MS檢測前的前處理方法主要包括：

1、蛋白沉淀法(PPT)：PPT是應用最早、耗時最少、已被廣泛應用于 生物分析的樣品前處理方法，具有簡單、快速、經濟的特點，是常用甚至首 選的樣品前處理方法。血樣在LC-MS/MS分析測定之前，必須首先進行去蛋白 處理。通過加入蛋白沉淀劑，使蛋白質變性，然后再混合、離心，形成蛋白 沉淀和上清液，直接進樣或稀釋后進樣檢測。常見的蛋白沉淀劑有：①與水 混溶的有機溶劑，如乙腈、甲醇、乙醇、丙酮等，2-3倍體積于樣品混合，使 蛋白質分子內和分子間氫鍵改變而凝聚，經離心去除；②中性鹽，飽和硫酸 銨、硫酸鈉等，使蛋白脫水而沉淀；③強酸：如10％三氯乙酸、6％高氯酸等， 使pH低于蛋白等電點，形成不溶性鹽而沉淀；④鋅鹽、銅鹽、硫酸鋅等，金 屬鹽離子與蛋白羧基形成不溶性鹽而沉淀；⑤酶、枯草菌溶素等，測定一些 酸不穩(wěn)定及蛋白結合牢固的物質。該方法在處理大量的樣品時比較耗時，效 率不高；PPT處理的樣品凈化程度低，如不進行適當的色譜分離，會引起很強 的基質效應；處理過程中樣品濃度被稀釋，不適合待測物含量較少的樣品前 處理；處理過程中需要使用到高速離心機，成本高并且不利于整個流程的自 動化。