[發(fā)明專利]豆蔻酰化四肽的分子印跡整體柱及制備方法和應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110568394.0
• 申請日: 2021-05-25
• 公開（公告）號: CN113262768B
• 公開（公告）日: 2022-05-31
• 發(fā)明（設計）人: 劉照勝;郝文靜;黃艷萍
• 申請（專利權）人: 天津醫(yī)科大學
• 主分類號: B01J20/26
• 分類號: B01J20/26;B01J20/281;B01J20/30;B01D15/22;G01N33/68
• 代理公司: 天津市杰盈專利代理有限公司 12207
• 代理人: 趙尊生

1.一種豆蔻酰化四肽的分子印跡整體柱，其特征在于它的原料的質量比為：

豆蔻酰化四肽 2.17 %-2.27 %

4-烯丙氧基苯甲醛 0.01 %-0.65 %

N, N’-二烯丙基酒石酸二酰胺 0.01 %-4.03 %

N, N’-亞甲基雙丙烯酰胺 6.69 %-10.84 %

八乙烯基籠型倍半硅氧烷 0.01 %-0.36 %

二甲基亞砜 47.69 %-49.97 %

十二醇 35.55 %-37.25 %

偶氮二異丁腈 0.39 %-0.41 %

上述的各原料的質量百分比組成之和為100 %；

制備方法經過下列步驟：

1）按計量將豆蔻酰化四肽與 4-烯丙氧基苯甲醛溶于DMSO中，在水浴60℃條件下反應20-24小時，生成模板-功能單體復合物，然后加入功能單體N, N’-二烯丙基酒石酸二酰胺，交聯(lián)劑八乙烯基籠型倍半硅氧烷及N, N’-亞甲基雙丙烯酰胺，引發(fā)劑偶氮二異丁腈，并以二甲基亞砜和十二醇作為致孔劑，將上述試劑混合在一起，將反應液超聲處理15-20分鐘直到混合物均勻，澄清，不發(fā)生相分離，得到混合溶液；

2）將混合溶液注入到毛細管中，毛細管兩端用橡皮塞密封，置于水浴鍋60-65℃下反應4-5個小時，得到印跡整體柱；

3）制備的印跡整體柱依次用乙腈、體積比為9:1的甲醇和乙酸沖洗，除去模板及未反應的試劑；

4）制備的印跡整體柱通過700 μL 0.5 mol/L氫氧化鈉溶液沖洗, 功能單體4-烯丙氧基苯甲醛的醛基通過歧化反應, 變成羥基和羧基，從而產生與模板分子的結合位點，最終得到基于共價印跡及印跡后修飾方法的印跡整體柱。

2.按照權利要求1所述的豆蔻酰化四肽的分子印跡整體柱，其特征在于它的原料的質量比為：

豆蔻酰化四肽 2.22 %

4-烯丙氧基苯甲醛 0.63 %

N, N’-二烯丙基酒石酸二酰胺 2.46 %

N, N’-亞甲基雙丙烯酰胺 8.86 %

八乙烯基籠型倍半硅氧烷 0.35 %

二甲基亞砜 48.75 %

十二醇 36.33 %

偶氮二異丁腈 0.40 % 。

3.權利要求1所述的豆蔻酰化四肽的分子印跡整體柱的制備方法，其特征在于經過下列步驟：

1）按計量將豆蔻酰化四肽與 4-烯丙氧基苯甲醛溶于DMSO中，在水浴60℃條件下反應20-24小時，生成模板-功能單體復合物，然后加入功能單體N, N’-二烯丙基酒石酸二酰胺，交聯(lián)劑八乙烯基籠型倍半硅氧烷及N, N’-亞甲基雙丙烯酰胺，引發(fā)劑偶氮二異丁腈，并以二甲基亞砜和十二醇作為致孔劑，將上述試劑混合在一起，將反應液超聲處理15-20分鐘直到混合物均勻，澄清，不發(fā)生相分離，得到混合溶液；

2）將混合溶液注入到毛細管中，毛細管兩端用橡皮塞密封，置于水浴鍋60-65℃下反應4-5個小時，得到印跡整體柱；

3）制備的印跡整體柱依次用乙腈、體積比為9:1的甲醇和乙酸沖洗，除去模板及未反應的試劑；

4）制備的印跡整體柱通過700 μL 0.5 mol/L氫氧化鈉溶液沖洗, 功能單體4-烯丙氧基苯甲醛的醛基通過歧化反應, 變成羥基和羧基，從而產生與模板分子的結合位點，最終得到基于共價印跡及印跡后修飾方法的印跡整體柱。

4.按照權利要求3所述的制備方法，其特征在于步驟1）中的毛細管柱為250 μm I.D.。

5.權利要求1所述的豆蔻酰化四肽的分子印跡整體柱在富集豆蔻酰化蛋白質組學的鑒定中的應用。

6.按照權利要求5所述的應用，其特征在于用于富集 MCF-7 細胞中豆蔻酰化修飾蛋白質及肽段。