[發明專利]一種復蘇細胞的方法及應用

有效

• 申請號: 202110566729.5
• 申請日: 2021-05-24
• 公開（公告）號: CN113293136B
• 公開（公告）日: 2023-06-13
• 發明（設計）人: 萬謙;彭文珍;王銳峰
• 申請（專利權）人: 成都新生命霍普醫學檢驗實驗室有限公司
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09
• 代理公司: 成都行之專利代理事務所(普通合伙) 51220
• 代理人: 唐邦英

本發明公開了一種復蘇細胞的方法及應用，方法包括以下步驟：S1、將存儲有待復蘇細胞的凍存管進行解凍融化得到細胞液體；S2、向步驟S1中獲得的細胞液體中加入PBS，混勻獲得細胞混合溶液，所述PBS與細胞液體的體積比為4:1；S3、將混勻后的細胞混合溶液加入六孔板的其中一孔中，放入細胞培養箱中靜置幾分鐘，吸棄上清液；S4、向吸干上清液的孔中加入培養液重懸細胞沉淀，放入細胞培養箱中培養，所述培養液的與加入孔中的細胞混合溶液中細胞液體的體積為5:1。本發明不需要使用離心機，也不需要對細胞進行洗滌就能實現細胞復蘇，且復蘇時間較短，能夠適用于沒有離心機、細胞數量少、時間緊迫的場合。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種復蘇細胞的方法及應用。

背景技術

凍存和復蘇細胞是細胞生物學實驗中很重要的基本操作。一般細胞凍存液為含有10％(v/v)二甲基亞砜(DMSO)的細胞培養液，因此，傳統的復蘇方法在進行細胞復蘇之間需要對細胞進行洗滌除去二甲基亞砜(DMSO)，傳統的復蘇方法主要采用離心機進行離心去上清液的方式，所以，傳統的復蘇方法要用到離心機進行細胞洗滌。然而，傳統的復蘇方法在一些場合不太適用：

(1)在暫時沒有合適的離心機可用的場合，比如離心機出現故障正在維修期間；

(2)細胞數量少，如何進行常規洗滌操作會損失較多細胞的場合；

(3)時間緊迫，沒有洗滌細胞的充足時間的場合。

發明內容

本發明的目的在于提供一種復蘇細胞的方法，不需要使用離心機，也不需要對細胞進行洗滌就能實現細胞復蘇，且復蘇時間較短，能夠適用于沒有離心機、細胞數量少、時間緊迫的場合。

本發明通過下述技術方案實現：

一種復蘇細胞的方法，包括以下步驟：

S1、將存儲有待復蘇細胞的凍存管進行解凍融化得到細胞液體；

S2、向步驟S1中獲得的細胞液體中加入PBS，混勻獲得細胞混合溶液，所述PBS與細胞液體的體積比為4:1；

S3、將混勻后的細胞混合溶液加入六孔板的其中一孔中，放入細胞培養箱中靜置幾分鐘，吸棄上清液；

S4、向吸干上清液的孔中加入培養液重懸細胞沉淀，放入細胞培養箱中培養，所述培養液的與加入孔中的細胞混合溶液中細胞液體的體積為5:1。

細胞凍存液一般含有10％的二甲基亞砜(DMSO)，加入這些DMSO的目的在于防止在細胞凍存時細胞的內容物形成冰晶，進而損傷細胞，所以DMSO是一種細胞凍存保護劑；但是，DMSO有一定的細胞毒性，在復蘇細胞是必須去除，因此傳統的細胞復蘇采用離心去除上清液去除DMSO。

申請人通過長期研究和實驗發現：

(1)培養細胞在靜置時會自然下沉，特別是一些貼壁生長的培養細胞，例如人宮頸癌細胞Hela細胞，在靜置5分鐘時，超過80％的懸浮細胞會下沉到培養容器的底部；

(2)六孔板的其中一個孔加入5ml培養液后，再用移液器吸取丟棄這些培養液后，在這個培養孔殘留的培養液只有約0.08ml；

(3)當DMSO濃度小于0.1％時，對細胞的毒性可以忽略，不會干擾細胞的正常培養，通常被認為沒有細胞毒性。

本發明所述方法的發明構思是基于上述發現獲得：

本發明的細胞液體不經過離心沉淀去上清液進行細胞洗滌去除DMSO，而是直接將細胞液體與PBS的混合液體直接加入六孔板的其中一孔中，靜置吸棄上清液，吸干上清液后的孔中DMSO的殘留量小于0.1％，然后直接加入培養液進行配方復蘇。