[發明專利]測序方法

在審

• 申請號: 202110566022.4
• 申請日: 2021-05-24
• 公開（公告）號: CN113293205A
• 公開（公告）日: 2021-08-24
• 發明（設計）人: 劉磊;駱瑋瑋;樊濟才;陸永藝;陳方;孫雷
• 申請（專利權）人: 深圳市真邁生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6874
• 分類號: C12Q1/6874
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種測序方法，其特征在于，包括：

提供表面連接有多個單鏈核酸的固相基底，所述單鏈核酸的5'末端與所述表面連接，所述單鏈核酸為包含插入片段-第一序列的多核苷酸，所述插入片段為來自待測樣本的核酸序列，所述第一序列為包含標簽-第一位點的預設序列，所述標簽為特異性對應所述待測樣本的預設序列；

提供第一測序引物，所述第一測序引物能夠與所述第一位點的5'末端雜交；以及

使所述第一測序引物與所述單鏈核酸雜交并置于適于進行聚合測序的條件下，以通過延伸所述第一測序引物對所述單鏈核酸的一部分序列進行測定，獲得測序結果。

2.權利要求1的方法，其特征在于，所述測序結果據包括讀段，所述讀段包含所述標簽和至少一部分所述插入片段的序列信息；

任選地，所述讀段的長度不小于所述標簽的長度的四倍。

3.權利要求1的方法，其特征在于，所述第一序列為包含第二位點-標簽-第一位點的預設序列，所述方法還包括：

提供第二測序引物，所述第二測序引物能夠與所述第二位點的5'末端雜交；

使所述第二測序引物與所述單鏈核酸雜交并置于適于進行聚合測序的條件下，以通過延伸所述第二測序引物對所述單鏈核酸上的插入片段的至少一部分序列進行測定，獲得所述測序結果；

任選地，所述測序結果包括第一讀段和第二讀段，所述第一讀段包含所述標簽的序列信息，所述第二讀段包含至少一部分所述插入片段的序列信息。

4.權利要求3的方法，其特征在于，所述單鏈核酸為包含第二序列-插入片段-第一序列的多核苷酸，所述第二序列為包含第三位點的預設序列；

任選地，所述單鏈核酸通過所述第二序列的5'末端共價連接于固相基底的表面。

5.權利要求4的方法，其特征在于，所述標簽為第一標簽，所述第二序列為包含第二標簽-第三位點的預設序列或者為包含第四位點-第二標簽-第三位點的預設序列，所述第二標簽為特異性對應所述待測樣本的預設序列；

任選地，還包括：

提供第三測序引物，所述第三測序引物能夠與所述第三位點的5'末端雜交；以及

使所述第三測序引物與所述單鏈核酸雜交并置于適于進行聚合測序的條件下，以通過延伸所述第三測序引物對所述單鏈核酸上的第二標簽的序列進行測定，獲得所述測序結果；

任選地，所述測序結果還包括第三讀段，所述第三讀段包含所述第二標簽的序列信息。

6.權利要求5的方法，其特征在于，所述單鏈核酸為第一單鏈核酸，所述表面還連接有第二單鏈核酸，所述第二單鏈核酸為所述第一單鏈核酸的互補鏈，所述第二單鏈核酸通過其上的與所述第一序列互補的部分的5'末端與所述表面連接；

任選地，其特征在于，還包括：

提供第四測序引物，所述第四測序引物能夠與所述第二單鏈核酸上的與所述第三位點互補的部分的5'末端雜交；以及

使所述第四測序引物與所述第二單鏈核酸雜交并置于適于進行聚合測序的條件下，以通過延伸所述第四測序引物對所述單鏈核酸上的插入片段的至少一部分序列進行測定，獲得所述測序結果。

7.權利要求5的方法，其特征在于，所述單鏈核酸為第一單鏈核酸，所述表面還連接有第二單鏈核酸，所述第二單鏈核酸為所述第一單鏈核酸的互補鏈，所述第二單鏈核酸通過其上的與第一序列互補的部分的5'末端與所述表面連接，所述第二序列為包含第四位點-第二標簽-第三位點的預設序列，所述方法還包括：

提供第三測序引物，所述第三測序引物能夠與所述第二單鏈核酸上的與第三位點互補的部分的5'末端雜交；

提供第四測序引物，所述第四測序引物能夠與所述第二單鏈核酸上的與第四位點互補的部分的5'末端雜交；

使所述第三測序引物與所述第二單鏈核酸雜交并置于適于進行聚合測序的條件下，以通過延伸所述第三測序引物對所述單鏈核酸上的插入片段的至少一部分序列進行測定；以及

使所述第四測序引物與所述第二單鏈核酸雜交并置于適于進行聚合測序的條件下，以通過延伸所述第四測序引物對所述單鏈核酸上的第二標簽的序列進行測定，獲得所述測序結果。