[發(fā)明專利]全禽源遺傳系統(tǒng)及其在制備H7N9禽流感疫苗中的應(yīng)用有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 202110564096.4 | 申請(qǐng)日： | 2021-05-24 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN113025653B | 公開（公告）日： | 2021-09-24 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 亓文寶;廖明;陳意群;李華楠;李波;張家豪;邱子雯 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 華南農(nóng)業(yè)大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | C12N15/85 | 分類號(hào)： | C12N15/85;C12N15/44;C12N7/01;A61K39/145;A61P31/16;C12R1/93 |
| 代理公司： | 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司 44102 | 代理人： | 趙崇楊 |
| 地址： | 510642 廣*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 全禽源 遺傳 系統(tǒng) 及其 制備 h7n9 禽流感 疫苗 中的 應(yīng)用 | ||
1.一種H7N9亞型禽流感重組病毒，其特征在于，由高致病性H7N9亞型禽流感流行毒株改造后的HA基因和NA基因，與H5N2亞型禽流感病毒D7株的六個(gè)內(nèi)部基因PB2、PB1、PA、NP、M和NS構(gòu)成；所述改造后的HA基因序列如SEQ ID NO：9所示，NA基因序列如SEQ ID NO：10所示；所述D7株的六個(gè)基因PB2、PB1、PA、NP、M和NS的核苷酸序列依次如SEQ ID NO：1～3、5、7～8所示；所述高致病性H7N9亞型禽流感流行毒株為A/Chicken/Liaoning/19155/2019。
2.權(quán)利要求1所述H7N9亞型禽流感重組病毒的制備方法，其特征在于，將高致病性H7N9亞型禽流感流行毒株改造后的HA基因和NA基因與H5N2亞型禽流感病毒D7株的六個(gè)內(nèi)部基因PB2、PB1、PA、NP、M和NS一起拯救出重組病毒，即得。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述制備方法，其特征在于，所述方法包括構(gòu)建分別表達(dá)所述的H5N2亞型禽流感病毒D7株P(guān)B2、PB1、PA、NP、M和NS的6個(gè)質(zhì)粒，構(gòu)建分別表達(dá)SEQ ID NO：9所述序列的改造后HA基因和SEQ ID NO：10所述序列的NA基因的2個(gè)質(zhì)粒，將上述8種質(zhì)粒混合，并與轉(zhuǎn)染試劑一起加入到293T細(xì)胞中，拯救獲得H7N9亞型禽流感重組病毒。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述制備方法，其特征在于，所述方法具體包括如下步驟：
S1.構(gòu)建H5N2亞型禽流感病毒D7株的八質(zhì)粒反向遺傳操作系統(tǒng)，所述八質(zhì)粒為分別包含H5N2亞型禽流感D7株P(guān)B2、PB1、PA、HA、NP、NA、M和NS 8個(gè)基因片段的重組質(zhì)粒；所述D7株的八個(gè)基因PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、M和NS的核苷酸序列依次如SEQ ID NO：1～8所示；
S2.構(gòu)建分別表達(dá)SEQ ID NO：9所述序列的改造后HA基因和SEQ ID NO：10所述序列的NA基因的2個(gè)質(zhì)粒；
S3.將步驟S1中表達(dá)H5N2亞型禽流感病毒D7株P(guān)B2、PB1、PA、NP、M和NS的6個(gè)質(zhì)粒與步驟S2中表達(dá)改造后HA基因和NA基因的2個(gè)質(zhì)粒混合，并與轉(zhuǎn)染試劑一起加入到293T細(xì)胞中，培養(yǎng)后獲得H7N9亞型禽流感重組病毒。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述制備方法，其特征在于，所述重組質(zhì)粒為pSMC-PB2、pSMC-PB1、pSMC-PA、pSMC-HA、pSMC-NP、pSMC-NA、pSMC-M和pSMC-NS。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述制備方法，其特征在于，所述pSMC載體的構(gòu)建方法為將pCI載體質(zhì)粒上的
7.一種基于反向遺傳技術(shù)的重組全禽源H7N9亞型禽流感疫苗候選株，其特征在于，包括免疫量的權(quán)利要求1所述的H7N9亞型禽流感重組病毒。
8.權(quán)利要求1所述H7N9亞型禽流感重組病毒、或權(quán)利要求7所述的重組全禽源H7N9亞型禽流感疫苗候選株在制備預(yù)防H7N9亞型禽流感疫苗中的應(yīng)用。
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