[發(fā)明專利]全禽源遺傳系統(tǒng)及其在制備H7N9禽流感疫苗中的應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110564096.4
• 申請日: 2021-05-24
• 公開（公告）號: CN113025653B
• 公開（公告）日: 2021-09-24
• 發(fā)明（設計）人: 亓文寶;廖明;陳意群;李華楠;李波;張家豪;邱子雯
• 申請（專利權）人: 華南農業(yè)大學
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/44;C12N7/01;A61K39/145;A61P31/16;C12R1/93
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 趙崇楊

本發(fā)明公開了一種全禽源反向遺傳操作系統(tǒng)及其在制備H7N9亞型禽流感疫苗中的應用。所述全禽源反向遺傳操作系統(tǒng)為H5N2亞型禽流感D7株的八質粒反向遺傳操作系統(tǒng)（D7系統(tǒng)），為分別包含H5N2亞型禽流感D7株PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、M和NS 8個基因片段的重組質粒。所述H7N9亞型禽流感疫苗由高致病性H7N9亞型禽流感流行毒株改造后的HA基因和NA基因與H5N2亞型禽流感D7系統(tǒng)的六個內部基因PB2、PB1、PA、NP、M和NS構成。所述重組病毒能在雞胚上保持良好的生長滴度和抗原性，且以D7系統(tǒng)為骨架拯救出的重組禽流感病毒為無致病力毒株，完全滿足生物安全性要求，具有較大的應用前景。

技術領域

本發(fā)明涉及反向遺傳學技術和動物傳染病技術領域，更具體地，涉及一種全禽源反向遺傳操作系統(tǒng)及其在制備H7N9亞型禽流感疫苗中的應用。

背景技術

禽流感（Avian influenza，AI）是由禽流感病毒（Avian influenza virus，AIV）引起的一種感染和/或疾病綜合征，嚴重影響家禽養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展并威脅人類健康，家禽感染后可表現出不同的臨床癥狀，根據致病性不同可將其分為低致病性禽流感（Low pathogenicavian influenza，LPAI）和高致病性禽流感（Highly pathogenic avian influenza，HPAI）。2013年出現的低致病性H7N9亞型禽流感病毒在我國禽群和人群中廣泛流行，而2016年下半年，廣東地區(qū)出現了高致病性H7N9亞型禽流感變異株，并迅速在養(yǎng)殖場和人群中傳播和流行。H7N9亞型禽流感病毒進化和變異迅速，對動物和人類產生極大威脅，快速研制保護性好的禽流感疫苗十分重要。

為了滿足大規(guī)模生產要求，減少由于疫苗供應不足或免疫效果差等原因造成的損失，迫切需要制備出免疫保護效果理想的疫苗株。因此，必須對流行毒株進行改造，除保持原有的免疫原性、消除其致病能力外，還要提高疫苗候選株在雞胚培養(yǎng)過程中的病毒滴度。利用反向遺傳學技術構建禽流感疫苗是目前主要的技術手段，然而現有技術中通過選擇利用人流感疫苗骨架來構建重組禽流感疫苗（例如：Hoffmann E,Krauss S, Perez D et al.Eight-plasmid system forrapid generation of influenza virus vaccines.Vaccine, 2002, 20:3165- 3170），由于含有人源基因，容易造成重組禽流感疫苗感染人類的風險。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的在于克服現有技術中存在的上述缺陷和不足，提供一種全禽源反向遺傳操作系統(tǒng)。

本發(fā)明的第二個目的在于提供所述全禽源反向遺傳操作系統(tǒng)在制備H7N9亞型禽流感疫苗中的應用。

本發(fā)明的第三個目的在于提供一種H7N9亞型禽流感重組毒株。

本發(fā)明的上述目的是通過以下技術方案給予實現的：

一種基于H5N2亞型禽流感D7株的全禽源反向遺傳操作系統(tǒng)（D7系統(tǒng)），為H5N2亞型禽流感D7株的八質粒反向遺傳操作系統(tǒng)，所述八質粒為分別包含H5N2亞型禽流感D7株PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、M和NS 8個基因片段的重組質粒；所述D7株的八個內部基因PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、M和NS的核苷酸序列依次如SEQ ID NO：1～8所示。

所述以H5N2亞型禽流感D7株制備的疫苗為華南農業(yè)大學于2013年研制出的全球第一個全禽源的水禽專用H5N2亞型禽流感滅活疫苗；本發(fā)明利用該水禽專用且高度適應雞胚的禽流感病毒D7株，建立了基于D7株的八質粒反向遺傳操作系統(tǒng)（D7系統(tǒng)）用于禽流感疫苗開發(fā)。以D7系統(tǒng)為骨架拯救出重組禽流感病毒的全部基因片段都來自禽源，這保留了禽流感病毒與人流感病毒之間所固有的種間屏障，降低了重組禽流感疫苗感染人類的風險，完全滿足生物安全性要求。