[發明專利]一種三聯毒品熒光免疫層析試劑紙、檢測試劑盒和檢測方法

在審

• 申請號: 202110563112.8
• 申請日: 2021-05-24
• 公開（公告）號: CN113358862A
• 公開（公告）日: 2021-09-07
• 發明（設計）人: 唐勇;徐濤;滕佩君
• 申請（專利權）人: 暨南大學
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/558;G01N33/58
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 郭煒綿

本發明公開了一種三聯毒品熒光免疫層析試劑紙、檢測試劑盒和檢測方法。所述的三聯毒品熒光免疫層析試紙條，是由樣品墊、NC膜和吸水墊組成；所述的NC膜，從靠近樣品墊的一端依次設有MET檢測線、MOR檢測線、KET檢測線和質控線。檢測時，將污水待測樣品與磁性熒光探針凍干粉孵化反應，回收，加入檢測卡點樣孔中，層析后將檢測卡觀察孔用熒光讀取儀掃描；通過標準曲線，以及各檢測線與質控線電信號的比值計算三種毒品代謝物的濃度。本發明檢測樣本時先利用磁性熒光探針的磁響應功能捕獲并富集待檢物質，降低其他物質干擾；然后利用多聯檢測試紙條定量檢測樣品中多種待檢物質。靈敏度可達ng/L，滿足對污水中毒品代謝物的各級溯源要求。

技術領域

本發明屬于毒品分析檢測領域，具體涉及一種三聯毒品(甲基苯丙胺MET、嗎啡MOR、氯胺酮KET)熒光免疫層析試劑紙、檢測試劑盒和檢測方法。

背景技術

目前，甲基苯丙胺MET、嗎啡MOR、氯胺酮KET是濫用最為廣泛的三種毒品。

非法藥物濫用量的監控一般是通過社會流行病學調查進行，該方法具有很大的局限性和不確定性。

自2001年污水流行病學的概念被提出后，基于污水流行病學的毒情研判技術也逐步被應用到藥物濫用的檢測中。污水中毒品及其代謝物的主要來源為吸毒人員排泄物、突擊緝查時吸毒人員為毀滅證據經下水道沖走的毒品、及制毒場所排放的廢水等。通過對城市地下道污水系統中毒品及其代謝物的含量監測能夠推算出某種毒品在當地的使用情況。污水中毒品代謝物的監測不僅有助于對吸毒、販毒分子進行有效抓捕，還能通過逐級定點檢測對制毒窩點進行精準溯源定位。

但污水中毒品及其代謝物的含量較低，毒品及其代謝物的種類比較復雜。如何針對污水中最常見的多種毒品作出高效、快速、準確、穩定的檢測成為了亟待解決的問題。常規的分析手段很難滿足同時對污水中多種微量毒品快速檢測的需求，有效的前處理手段和高效、靈敏的分析方法是監測環境中多種濫用藥物的關鍵。

目前甲基苯丙胺、嗎啡和氯胺酮等毒品的定量檢測和監控方法主要依賴于大型儀器，如高效液相色譜、氣相色譜、液質或氣質連用等。這些方法靈敏度高、重復性好，但操作復雜，儀器設備昂貴，分析效率低。

酶聯免疫吸附測定(ELISA)以及膠體金免疫層析法是目前國際上較為認可的主流檢測技術，這兩種方法檢測速度快，價格便宜，操作簡便。但ELISA檢測仍需專業人員操作，且結果顯示時間長；膠體金免疫層析技術也只能對尿液、血液或唾液等毒品代謝物含量高的樣本進行定性分析，存在靈敏度低、批間差異大、分析效率低等問題。

發明內容

本發明提供了一種三聯毒品(甲基苯丙胺MET、嗎啡MOR、氯胺酮KET)熒光免疫層析試劑紙、檢測試劑盒和檢測方法，檢測靈敏度可達ng/L(目前多數熒光免疫層析試紙條檢毒品的靈敏度在ng/mL范圍內)，分析效率高、線性范圍好，可以較好地對城市污水中多種毒品代謝物進行現場溯源處理，幫助公安緝毒人員對城市中的毒品產業鏈進行即時的監測和治理。

本發明的目的通過下述技術方案實現：

磁性熒光探針的制備方法，包括如下步驟：

(1)標記抗體：將磁性熒光微球活化后，用MES(2-(N-嗎啉代)乙磺酸)緩沖液超聲重懸，分別加入MET抗體、MOR抗體、KET抗體、羊抗雞IgY抗體，室溫下低速混旋反應至少1h；

(2)封閉：向各抗體標記的磁性熒光微球中分別加入BSA(牛血清白蛋白)，旋轉反應至少30min，離心后取沉淀，得到三種檢測探針(MET抗體標記磁性熒光探針、MOR抗體標記磁性熒光探針、KET抗體標記磁性熒光探針)和一種質控探針(羊抗雞IgY抗體標記磁性熒光探針)；

步驟(1)所述的活化，是將磁性熒光微球用MES緩沖液清洗并重懸，再加入EDC(碳二亞胺)和NHS(N-羥基琥珀酰亞胺)，室溫下混旋反應至少30min，離心后取沉淀；